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子宮頚がん発生におけるHPV DNAの組み込みとE6、E7発現増加機構の解明

阐明 HPV DNA 整合和 E6 和 E7 表达增加在宫颈癌发展中的机制

基本信息

批准号：
18012051
负责人：
清野透
金额：
$ 7.3万
依托单位：
National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18012051/
关键词：
HPV 子宮頸がん E6 E7 組み込み DNA-PK E2F ヒトパピローマウイルス

项目摘要

不死化子宮頸部由来正常細胞株にHPV16ゲノムを導入することで数10-100コピーのHPV16ゲノムをepisomalに維持する細胞株の樹立に成功した.この細胞は従来報告されているものと異なり,feeder細胞なしに長期間維持出来ることが明らかになった.子宮頸部異形成由来の細胞株W12などと異なり,これまでHPVゲノムの細胞ゲノムへの組み込みは確認されていない.この細胞株を用いることで,episomal HPV16ゲノムの維持と組み込み機構ならびに,がん化の引き金になるE6とE7遺伝子の高発現に至る機構の解析が再現性良くできると考えている.この細胞でDNA-PKcs,Ku70,Ku86など非相同組み換え修復に関わる遺伝子発現をノックダウンした.これまでのところ,組み込み頻度への影響は確認出来ていないが,Ku70,Ku86をそれぞれ単独でノックダウンするとKu70,Ku86の両者の蛋白量が減少しDNA-PKcs蛋白量も減少する傾向が見られた.<BR> DNA-PK活性と子宮頸癌との相関は,統計学的に確かであるが,原因が分からずその解明は非常に重要である.DNA-PK活性の個人差が出てくる理由の追及を進め,DNA-PKcs,Ku86,Ku70の発現調節にE2Fファミリーが制御に関わっている可能性を見出した.具体的には,8名(がん患者4名,健常者4名)のリンパ球のマクロアレイ解析を行い,DNA-PK活性やサブユニット発現と相関が強い分子を探索した.その結果,Rap1B,Rad9,XRCC3,SUMO,E2F1,Cyclin D1などの発現が正の相関を示し,逆に,強い逆相関を示したものとしてRbp130が見いだされた.このことから,E2Fファミリーが調節に関わっている可能性を考えられたが,実際,DNA-PKcs,Ku86,Ku70全てのプロモータ領域にE2Fのbinding siteが見つかり,PHAで刺激するとDNA-PK活性とともに,mRNA発現上昇も見られた.更にこれを検証するためには,siRNAなどを用いた実験を進めている.また,E2F以外の転写調節機構が関わる可能性も検討していく必要がある。

HPV16 gene expression was successfully introduced into normal cell lines derived from the cervix of the uterus, and the number of HPV16 gene expression was 10-100. The cells report to the feeder cells and maintain them for a long time. Cell line W12 from which cervical heterogenesis originated was identified. This cell line was used to detect the high expression of E6 and E7 genes and to analyze the structure of HPV16. These cells are DNA-PKcs, Ku70, Ku86, and different groups. The effect of group frequency on protein content was confirmed. The protein content of Ku70, Ku86 was decreased. <BR>The correlation between DNA-PK activity and cervical cancer is statistically significant. The individual differences in DNA-PK activity are statistically significant. The reasons for these differences are statistically significant. The possibility of regulating the development of DNA-PKcs, Ku86, Ku70 is statistically significant. Specifically, 8 patients (4 patients and 4 healthy subjects) were analyzed for DNA-PK activity and related strong molecules. The results showed that Rap1B,Rad9,XRCC3,SUMO,E2F1,Cyclin D1 showed positive correlation, negative correlation, strong negative correlation and Rbp130 showed negative correlation. This time, the possibility that E2F may be regulated has been examined. In fact, the binding site of E2F in all fields of DNA-PKcs, Ku86, and Ku70 can be seen. When PHA stimulates DNA-PK activity,mRNA increases. In addition,siRNA can be used to detect the presence of the virus. E2F is the only way to write a regulatory mechanism.