权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

HIV-Tatに相互作用する細胞因子のクローン化と機能解析

与 HIV-Tat 相互作用的细胞因子的克隆和功能分析

基本信息

批准号：
07277201
负责人：
加藤宏幸
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07277201/
关键词：
HIV Tat 細胞因子転写活性化蛋白間相互作用プロテインキナーゼ

项目摘要

HIV-1 Tatは、その作用機構に対してのみならず、阻害剤の標的としても関心が寄せられている。本研究では、Tat結合因子のクローン化とその機能解析を目的とした。酵母発現HeLa cDNAライブラリーのスクリーニングにより、Tatに特異的相互作用を示す蛋白(以下TAM2)のcDNAを得た。TAM2は322アミノ酸から成り、N末端付近にSerとGlyに富む領域と、C末端付近にRing Fingerモチーフをとる領域を持つ。活性化に必要なTatのN-末端,Cys,Coreの各領域およびTAM2のRing Fingerモチーフを含む領域が相互作用に必須であることが、酵母内およびin vitroにおいて示された。この相互作用は核抽出液中のnative TAM2に対しても確認された。さらにTAM2はHeLa細胞核抽出液中のプロテインキナーゼを補足し、そのキナーゼによって強くリン酸化を受けた。このキナーゼはRNA pol II CTDもリン酸化した。以上からTAM2はTatとプロテインキナーゼを結びつける役割を持ち、TatによるHIV LTR転写活性化に必須な存在であることが示唆された。同様に手法でHIV integraseのcofactorであるヒトSNF複合体の構成因子hSNF2に相互作用する蛋白のクローン化を行った。この蛋白(SNF2BP1)はSNF2にin vitroおよびin vivoにおいて特異的相互作用を示すとともに、核抽出液中のSNF2複合体の構成因子もしくは強固に結合する因子であることが判明した。競合実験から、レチノイン酸リセプターに依存した転写活性化に必要な因子であった。よってHIV cofactorであるSNF複合体の機能的サブユニットの1つと考えられる。

HIV-1 Tatは, そのaction mechanism に対してのみならず, blocking のtarget としてもCare が出せられている. The purpose of this study is to analyze the functional properties of Tat-binding factors. The cDNA of HeLa cDNA and Tat-specific interaction protein (hereinafter TAM2) was obtained. TAM2 は 322 アミノ acid から成り, N-terminal close にSer とGly に rich む domain と, C-terminal close に Ring Finger モチーフをとる domain をhold つ. The N-terminal of Tat, which is necessary for activation, the N-terminal of Cys, Core, each field of TAM2, Ring Finger, the containing field, the interaction of which is necessary, and the yeast inside vitroにおいてshowsされた.このInteractionはNucleus extraction solutionのnative TAM2に対してもConfirmationされた.さらにTAM2はHeLa cell nucleus extract liquid is supplemented by のプロテインキナーゼを, and そのキナーゼによってstrong くリン acidified をReceived けた.このキナーゼはRNA pol II CTD もリン acidified した. Above からTAM2はTat とプロテインキナーゼを knot びつける丫杀をhold ち、TatによるHIV It is necessary to activate LTR by writing instructions. The cofactor of the HIV integrase is the same as hSNF2, the cofactor of the SNF complex.このprotein(SNF2BP1)はSNF2にin vitroおよびin It was revealed that the specific interaction of vivo and the strong binding factor of the SNF2 complex in the nuclear aspirate were confirmed. Competing and cooperating 実験から, レチノイン acid リセプターにdependence した転write the necessary な factor for activation であった. The HIV cofactor is the function of the SNF complex.