权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

マウスMCMタンパク質の機能とその制御機構

小鼠MCM蛋白的功能及其调控机制

基本信息

批准号：
07282201
负责人：
木村宏
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

MCMタンパク質は、細胞周期のM期の終了時にクロマチンと結合し、S期にDNA複製の進行に伴ってクロマチンから遊離することで、DNA複製が一度の細胞周期で唯一度だけ起こるための調節に関与している。しかしながら、その生化学的機能やクロマチンとの結合の調節機構はほとんど明らかになっていない。また、出芽酵母MCMがS期に核から細胞質へ移動するのに対し、マウスのタンパク質はクロマチンから遊離しても核に局在する。そこで、マウスMCM複合体の核への輸送とリン酸化の役割について検討した。MCM複合体の核輸送の制御機構を明らかにするため、それぞれのMCMをトランスフェクションにより発現させ、その局在を観察した。その結果、単独で発現させた場合に効率的に核に局在するのはP1MCM3とMCM2のみであった。そして、P1MCM3の欠失変異体や点突然変異体の作成により、そのC末端側に核移行シグナルが存在することを明らかにした。また、その核移行シグナル部分にみられるカゼインキナーゼ2のリン酸化部位をアラニンに置換した場合も核移行には影響を与えなかった。また、免疫沈降により、MCM3とCDC46が、そして、MCM2、Cdc21、CDC47、Mis5がそれぞれ強く結合していることが明らかになった。これらの結果から、CDC46はP1MCM3と、また、Cdc21-CDC47-Mis5複合体はMCM2と結合することで、核へ輸送されることが示唆された。さらに、マウス培養細胞の粗抽出液をゲル濾過カラムにかけ、各MCMに対する抗体で検出したところ、mMCM2、mP1MCM3、mCDC46、mCdc21,mCDC47の何れのMCMも500-550kDa付近に回収され、6つのMCMからなる複合体の存在も明らかになった。ただし、CDC46-P1MCM3とその他のタンパク質との結合は非常に弱いと考えられる。

DNA replication is associated with the initiation of DNA binding at the end of M phase of the cell cycle and with the initiation of DNA binding at S phase of the cell cycle. The function of biochemistry is to regulate the combination of the two. In addition, the budding yeast MCM moves from the nucleus to the cytoplasm during the S phase, and its protein is released from the nucleus. The nuclear transport and acidification of MCM complexes are discussed in detail. The nuclear transport control mechanism of MCM complex has been investigated. The result is that there is a high probability of success in P1 and MCM2. P1MCM3 has a missing point and a sudden change in the formation of a nuclear transition on the C terminal side. The nuclear migration of the two groups is a complex process. MCM2, CDC21, CDC47 and Mis5 are strongly bound to each other. CDC46-P1MCM3, CDC21-CDC47-Mis 5 complex MCM2, CDC21-CDC47-Mis5 complex MCM 3, CDC21-CDC47-Mis 5 complex MCM 3, CDC21-CDC47-Mis5 complex MCM 2, CDC21-CDC47-Mis5 complex MCM 3, CDC21-CDC47-Mis5 complex MCM2, CDC21-CDC47-Mis5 complex MCM 3, CDC21-CDC47-Mis 5 complex MCM 2, CDC21-CDC47-Mis 5 complex MCM 3, CDC21-CDC47-Mis 5 complex MCM 2, CDC21-CDC47-CDC47-Mis 5 complex MCM 3, CDC21-CDC47-Mis 5 complex MCM 2, CDC21-CDC21-CDC47-CDC47-CD In addition, the crude extract of cultured cells was filtered and the antibodies against each MCM were detected. mMCM2, mP1 MCM3, mCDC46, mCdc21, mCDC47 were detected and the MCM 500-550kDa complex was detected. CDC46-P1MCM3 is a very weak combination.