セミインタクト細胞核を用いた第三世代試験管内転写系の開発

利用半完整细胞核开发第三代体外转录系统

• 批准号: 16657057
• 负责人: 木村 宏
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16657057/
• 关键词: 転写制御; クロマチン; 細胞核; セミインタクト細胞; RNA; 試験管内転写系; 細胞生物学; 生化学; 転写; 細胞; 分子生物学

真核生物の転写制御を理解する上で、裸のDNAや再構成されたクロマチンを鋳型とした試験管内転写系が大きな役割を果たしてきた。しかし、細胞核ではDNAは高次クロマチン構造を取って存在しているため、これらの試験管内転写系により得られた知見が、どの程度細胞内の転写を反映しているかは定かではない。そこで、生細胞における転写制御機構を解明するためのモデル系として、細胞核構造・クロマチン構造を保持しつつ可溶性因子の除去と供給が可能なセミインタクト細胞を用いた転写系の構築を試みた。昨年度の研究により、非イオン性界面活性剤で膜を透過性にしたセミインタクト細胞にHeLa細胞抽出液を添加することで、ブロモウリジン三リン酸の取り込みを指標にした転写活性が上昇することを見出している。さらに、この転写活性の上昇は、転写の伸長反応の促進に加えて新規の開始反応にも起因することが示唆されている。そこで、テトラサイクリン(tet)誘導性レポーター遺伝子を持つ細胞からセミインタクト細胞を調整し、細胞抽出液とtet特異的転写活性化因子(Gal4-VP16)を添加することで、新規の転写が誘導されるかどうか検討した。その結果、tet依存的にレポーター遺伝子の転写が起こることが明らかになった。また、その転写産物はGal4-VP16の量に依存して増加した。これらの結果は、細胞抽出液と転写活性化因子によりセミインタクト細胞クロマチンの転写活性化を誘導できることを示している。今後、この系を利用して、クロマチン転写に関わる因子や転写活性化に伴うクロマチン構造変換を明らかにすることが可能になると考えられる。また、セミインタクト細胞と抽出液をそれぞれ異なる細胞種から調整し、それらを組み合わせることによって、発生・分化・組織特異的転写制御機構の解明も期待される。

In eukaryotes, it is necessary to write and control the system to understand, and then to make a naked DNA and then write it in the tube. In the cell, the nucleus, the DNA, the higher order, the data, the writing system, the knowledge, the degree, the degree, the degree The control machine explains that the system is responsible for the production of the cell, the cell. In last year's study, non-invasive interfacial activity was used to permeate the membrane. The HeLa cell extract was added to the cell extract, which was used in the study. On the Internet, and on the promotion of new regulations, the cause of the reaction has been shown to be instigated. This is the first time that the writing activation factor (Gal4-VP16) of the tet feature has been added, and that the new rules will be used in this paper. The results show that the tet-dependent children are writing information about how to make sure that they are clear. You know, you know, you write things, you know, Gal4-VP16, you know, you have to add something. The results showed that the activation factor was written in the cell extraction fluid and the activation factor was written in the cell extraction fluid. In the future, the system will use the information to write the activation factor and make it clear that it is possible. The extraction fluid from the cell culture system is used to determine whether the cell species is adjusted, the organization is integrated, and the organization of differentiation and differentiation organization is required to know that it is expected.

项目成果

The constitutive centromere component CENP-50 is required for recovery from spindle damage

• DOI: 10.1128/mcb.25.23.10315-10328.2005
• 发表时间: 2005-12-01
• 期刊: MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY
• 影响因子: 5.3
• 作者: Minoshima, Y;Hori, T;Fukagawa, T
• 通讯作者: Fukagawa, T

クロマチン機能の頑強性と可塑性を支える細胞核構造

核结构支持染色质功能的稳健性和可塑性

• 发表时间: 2006
• 期刊: 蛋白質核酸酵素 51
• 作者: 八木俊樹;植松圭吾;劉中美;神谷律;木村宏
• 通讯作者: 木村宏

Nuclear Dynamics (Ed. K. Takeyasu and K. Nagata)

核动力学（Ed. K. Takeyasu 和 K. Nagata）

• 发表时间: 2006
• 作者: Kagiyama Y;Gotouda K;Sakagami K;Yasuda K;Mochii M;Araki M;Mitsuda et al.;Ida et al.;荒木正介(分担執筆);木村 宏;Yukinori Minoshima et al.;Hiroshi Kimura;Yoshikazu Mikami et al.;木村 宏;木村宏;Hiroshi Kimura et al.
• 通讯作者: Hiroshi Kimura et al.

Functional region of CENP-H interacts with the Nuf2 complex that localizes to centromere during mitosis.

CENP-H 的功能区域与有丝分裂期间定位于着丝粒的 Nuf2 复合体相互作用。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Molecular and Cellular Biology 25(5)
• 作者: Kagiyama Y;Gotouda K;Sakagami K;Yasuda K;Mochii M;Araki M;Mitsuda et al.;Ida et al.;荒木正介(分担執筆);木村 宏;Yukinori Minoshima et al.;Hiroshi Kimura;Yoshikazu Mikami et al.
• 通讯作者: Yoshikazu Mikami et al.

クロマチン・染色体実験プロトコール(押村光雄・平岡泰/編)

染色质/染色体实验方案（Mitsuo Oshimura、Yasushi Hiraoka/eds.）

• 发表时间: 2004
• 作者: Yamamoto;K.;Ishihama;A.;木村 宏
• 通讯作者: 木村 宏