チトクロムP450系及び呼吸系ヘム蛋白質の機能解析

细胞色素P450系统和呼吸血红素蛋白的功能分析

• 批准号: 08249204
• 负责人: 川戸 佳
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08249204/
• 关键词: チトクロムP450; 電子伝達; NO合成酵素; 副腎皮質

(1)副腎皮質においてチトクロムP450sccと、NADPHからこの蛋白質に電子を伝達する蛋白質、アドレノドキシン還元酵素(ADR)とアドレノドキシン(ADX)の電子伝達相互作用を、ADR及びADXの蛋白回転運動を測定することで明らかにした。ADR及びADXはリン光色素エリスロシンで標識し、リン光異方性を測定した。P450sccリポソームにADXとADRを加えた系に、精製した抗P450scc抗体を加えP450sccを凝集させると、ADXとADRの回転運動はともに大きく低下した。このことから、10%くらいがP450scc+ADX+ADRという一時的な三者会合体を形成していることが明らかになった。(2)P450sccの蛍光コレステロール基質(コレステロールレゾルフィン)を用いて、生きた副腎皮質細胞中のP450sccのコレステロール代謝活性を時間分解し空間分解して測定する方法を開発した。NADPH刺激により発生する振動型のCa信号は、1分以内にP450scc活性を増加させるのにたいして、ACTH(副腎皮質刺激ホルモン)刺激によって発生する大型Caスパイクに振動が乗った形のCa信号は、3時間かかってやっとP450scc活性を増加させる。ACTHはエンドソーム輸送を活性にして、P450sccの基質コレステロールをミトコンドリアに運ぶことを活発にすることが原因らしい。(3)ブタ脳から精製したNO合成酵素(NOS-1)のヘム・COフラッシュホトリシスを行った。CO再結合緩和時間は、L-アルギニンの存在下では8.3ミリ秒の単一指数関数緩和であったが、L-アルギニン非存在下では1.5ミリ秒と16.9ミリ秒の2指数関数であった。

(1)P450scc, NADPH, protein, electron transfer protein, ADR, ADX, electron transfer interaction, ADR, ADX protein transfer movement in the adrenal cortex. ADR and ADX can be used to determine the optical anisotropy of the pigment. P450scc aggregation, ADX and ADR P450scc+ADX+ADR will form a combination of P450scc and ADX. (2) A method for measuring the metabolic activity of P450scc in adrenal cortical cells using time and space decomposition was developed. P450scc activity increased within 1 minute after NADPH stimulation, and increased within 3 minutes after ACTH stimulation. ACTH is the most important factor in the transport of P450. (3)NO synthase (NOS-1) is the most important enzyme in the production of NO synthase. CO recombination mitigation time is 8.3 seconds in the presence of L-Array.com and 1.5 seconds in the absence of L-Array.com and 2 seconds in the absence of L-Array.com

项目成果

川戸佳: "活動する脳グリア細胞のイメージング" 蛋白質核酸酵素. 42(表紙). (1997)

Yoshi Kawato：“活性脑神经胶质细胞的成像”蛋白质核酸酶 42（封面）。

KImoto,T.: "Imaging of Calcium Oscillations and Activity of Cytochrome P450scc in Adrenocortical Cells" Oxygen Homeostasis and and Its Dynamics. (印刷中). (1997)

KImoto, T.：“肾上腺皮质细胞中钙振荡和细胞色素 P450scc 活性的成像”氧稳态及其动力学（出版中）。

Kimoto,T.: "Digital Fluorescence Imaging of Elementary Steps of Neurosteroid Synthesis in Rat Brain Glial Cells" J.Pharm.Biomed.Anal.(印刷中). (1997)

Kimoto, T.：“大鼠脑胶质细胞神经类固醇合成基本步骤的数字荧光成像”J.Pharm.Biomed.Anal.（出版中）。

川戸佳: "膜蛋白質のダイナミクスと機能" 日本膜学会. 21. 240-246 (1996)

Yoshi Kawato：“膜蛋白的动力学和功能”日本膜学会 21. 240-246 (1996)。

Kimoto,T.: "Adrenocorticotropin induces Calcium Oscillations in Adrenal Fasciculata Cells:Single Cell Imaging" Biochem.Biophys.Res.Comm.221. 25-32 (1996)

Kimoto,T.：“促肾上腺皮质激素诱导肾上腺束状细胞钙振荡：单细胞成像”Biochem.Biophys.Res.Comm.221。