蛋白質・情報伝達物質の高感度運動測定による細胞内情報伝達処理機構の研究

通过蛋白质和信息传递体的高灵敏度测量研究细胞内信息传递和处理机制

• 批准号: 01460268
• 负责人: 川戸 佳
• 金额: $ 4.74万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01460268/
• 关键词: Pー450; 副腎皮質; ステロイドホルモン; 回転運動; コレステロ-ル; ミトコンドリア; ミクロソ-ム; 人工再構成膜; P-450

(1)副腎皮質細胞に於て、ステロイドホルモン合成反応の各種中間状態におけるPー450の動的存在状態の変化を解析した。牛副腎皮質から精製したadrenodoxin、adrenodoxin reductaseなどを、あらかじめadrenodoxin、adrenodoxin reductaseを取り去った副腎皮質ミトコンドリア内膜に加えて,コレステロ-ル結合型Pー450(SCC)との相互作用を調べた。adrenodoxinを加えるとPー450の運動性が上昇するが、ここにreductaseをくわえるとPー450の運動性は低下する、これはPー450(SCC)がadrenodoxinーadrenodoxin reductaseと短寿命複合体を作った結果である。これは昨年に得た結果とあわせることにより、ミトコンドリアにおいて、コレステロ-ル結合型Pー450(SCC)はPー450(SCC)ーadrenodoxinーadrenodoxin reductase三者複合体を作り電子が伝達され、コレステロ-ルがプレグネノロンに変換されるとこの三者複合体は解離する。これはコレステロ-ル非結合型Pー450(SCC)が他の蛋白と低い接着性しか持たないせいであろう。このようにしてうまく電子伝達のスイッチがONーOFFされている。(2)ラット肝臓ミクロソ-ムから精製したPー450MC、Pー450PB、epoxide hydrase、をPC/PE/PSからなる脂質二層膜に組み込んだ再構成膜を作成して相互作用を調べた。epoxide hydraseの抗体を加えるとPー450MC、Pー450PBの運動性が大きく減少し、両Pー450ともepoxide hydraseと一時的な複合体を作り基質のやり取りをしていることがわかった。(3)牛副腎皮質から精製したPー450(SCC)、Pー450(11β)、Pー450C21、Pー45017α、adrenodoxin、adrenodoxin reductase,NADPHーcytochrome Pー450 reductaeなどをPC/PE/PSやPC/PE/CLからなる脂質二層膜に組み込んだ再構成膜を作成し、各種Pー450の分子運動や上に述べた他の各種蛋白質との相互作用の違いを測定して電子伝達相互作用などのしくみを解析した。Pー450C21はNADPHーcytochrome Pー450 reductaeと短寿命複合体を作ることを見いだした。またPー450(SCC)とPー450(11β)が一時的な複合体を作り、そのほうがadrenodoxinからの電子伝達効率がよいという結果を得た。Pー45017αは他のPー450と比べて最も集合体を作りにくく、単独でよく運動していることがわかった。(4)再構成膜を用いた実験から、Pー450のヘム面が膜面から傾いている角度は各々55度(Pー450PB)、48度あるいは62度(Pー450MC)、38度もしくは78度(Pー450SCC)であることが分かった。

(1)Analysis of the changes of P-450 activity in adrenal cortical cells in various intermediate states of synthesis Adrenotoxin, adrenotoxin reductase, adrenotoxin, adrenotoxin, adrenotoxin Adrenotoxin is added to P-450 and its mobility is increased. Adrenotoxin reductase is reduced to P-450 (SCC). The results obtained in the past year showed that the three-way complex of P-450 (SCC) and P-450 (SCC) adrenotoxin reductase was dissociated from each other. This is the case with non-binding P-450 (SCC), which has low adhesion to other proteins. This is the first time I've ever seen an electronic device that's turned ON or OFF. (2)P450MC, P450PB, epoxyhydrase, PC/PE/PS, lipid bilayer membrane, recombination membrane, interaction modulation The mobility of epoxy-hydrase antibody increased to P-450 MC and P-450 PB, and the mobility of epoxy-hydrase complex decreased to P-450 and P-450 PB. (3)P450 (SCC), P450 (11 β), P450 C21, P45017 α, adrenotoxin, adrenotoxin reductase, NADPH cytochrome P450 reductae, PC/PE/PS, PC/PE/CL, lipid bilayer membrane, reconstitution membrane, molecular motion of various P450 molecules, and interaction of various proteins described above. P-450-C21 NADPH cytochrome P-450 reductae short-lived complex P-450 (SCC) P-450 (11 β) P-450 (SCC) P-450 (SCC) P-45017 α(4)The angle of the film surface is 55 degrees (P-450 PB), 48 degrees (P-450 MC) and 38 degrees (P-450 SCC), respectively.

项目成果

Y.Soma: ""Effects of Oxygen on the Relative Photodissociability of Cytochrome Pー450・CO Complex in Rat Liver Microsomes"" Biochemistry. (1990)

Y.Soma：“氧气对大鼠肝微粒体中细胞色素 P-450·CO 复合物的相对光解离性的影响”生物化学（1990）。

S.Kawato: ""Drugーinduction Decreases the Mobility of Cytochrome Pー450 in Rat LiverMicrosomes:Protein Rotation study"" J.Biochem. (1991)

S.Kawato：“药物诱导降低大鼠肝脏微粒体中细胞色素 P-450 的迁移率：蛋白质旋转研究”J.Biochem（1991）。

S.Komura: ""A Theoly of Optical Anisotropy Decay in Membranes"" J.Phys.Soc.Japan. 59. 2584-2595 (1990)

S.Komura：“膜中光学各向异性衰变的理论””J.Phys.Soc.Japan。

H.Etter: ""Rotation and Interactions with Epoxide Hydrase of Cytochrome Pー450 in Proteoliposomes"" J.Biol.Chem. (1991)

H.Etter：“蛋白脂质体中细胞色素 P-450 的旋转及其与环氧化物水合酶的相互作用”J.Biol.Chem。

Y.Ohta: ""Conversion of Cholesterol to Pregnelone Mobilizes Cytochrome Pー450 in the Inner Membrane of Adrenocortical Mitochondria:Protein Rotation Sutdy"" J.Biocem. 107. 97-104 (1990)

Y.Ohta：“胆固醇向孕烯酮的转化动员肾上腺皮质线粒体内膜中的细胞色素 P-450：蛋白质旋转研究”J.Biocem 107. 97-104 (1990)。