細胞の情報伝達を解析する走査型近視野原子間力顕微鏡の開発

开发用于分析细胞信息传输的扫描近场原子力显微镜

• 批准号: 07558225
• 负责人: 川戸 佳
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07558225/
• 关键词: 近視野原子間力顕微鏡; 副腎皮質細胞; ミトコンドリア; LDL; エンドソーム; グリア細胞; カンチレバ-

近視野顕微鏡と原子間顕微鏡を一体化した、走査型近視野原子間力顕微鏡を用いて研究を行った。世界的に難しいとされている、蛍光近視野解析を用いて生物的に重要性のある結果を得ることに成功した。低密度リポ蛋白質LDLは細胞内エンドソームに取り込まれて、基質コレステロールを輸送する。これは情報ステロイド合成の重要なステップである。Dil-LDLを副腎皮質細胞に加えて、細胞膜直下での初期エンドソーム(LDLを含む小胞体)を近視野蛍光像として世界で始めて捉えることに成功した。共焦点顕微鏡で観察した直径1μm程度の中期エンドソームと異なり、近視野蛍光像で捉えたのは細胞膜直下の初期エンドソームで、直径は200nm程度であった。コレステロールは次にミトコンドリアに運ばれて情報ステロイドに変換される。単離ミトコンドリアをカバーグラス上に貼り付けたものを用いて、ミトコンドリアの重要な活性を蛍光近視野観察出来た。cholesterol-resorufinは副腎皮質ミトコンドリア中のチトクロムP450sccで代謝され情報ステロイドであるpregnenoloneと蛍光性resorufinになる。このresorufinの蛍光を測定することで副腎皮質ステロイドホルモン合成の第一段階の酵素活性を可視化することができる。resorufin代謝を行ったミトコンドリア数は原子間力顕微鏡で観察できるミトコンドリア数の1/3程度であった。

Close-view field micro-atom, micro-atom integration, walking-type near-field atomic force micro-measurement, research and development. The results of the analysis of the importance of living things in the world have shown that they are successful. The low-density protein LDL was isolated from the cell, and the basic protein was collected from the cell. I don't know what to say. I don't know if it's important. Dil-LDL subcutaneum, cell, cell In the confocal micrometer, the diameter is 1 μ m, the medium-term, the close-vision field, the light image, the cell membrane, the diameter, the 200nm, the diameter, the diameter. I don't know. I don't know. I don't know what to do. Please tell me that it is important to detect the activity of light near the field. In the cholesterol-resorufin, you can use the P450scc to replace the information on the pregnenolone, the optical resorufin, etc. The first step of resorufin synthesis is enzyme activity, which can be used to determine the activity of enzyme. Resorufin is responsible for the number of atomic forces, the number of atoms, the number of atoms, the number of atomic forces, the number of atoms, the number of atoms.

项目成果

川戸 佳: "蛋白質のダイナミクスと機能" 日本膜学会. 21. 240-246 (1996)

Yoshi Kawato：“蛋白质动力学和功能”日本膜学会 21. 240-246 (1996)。

Yamada, M.: "Dynamic interactions of Rabbit Liver Cytochrome P450IA2 and P450IIB4 with Cytochrome b5 and NADPH-Cytochrome P450 Reductase in Proteoliposomes" Biochemistry. 345. 10113-10119 (1995)

Yamada, M.：“蛋白脂质体中兔肝细胞色素 P450IA2 和 P450IIB4 与细胞色素 b5 和 NADPH-细胞色素 P450 还原酶的动态相互作用”生物化学。