機能性人工細胞の設計・製作と時間分解計測による解析

功能性人造细胞的设计和生产以及使用时间分辨测量的分析

• 批准号: 03305002
• 负责人: 川戸 佳
• 金额: $ 4.35万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Co-operative Research (A)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03305002/
• 关键词: 人工細胞; 時間分解計測; チトクロムP-450; ロドプシン; 顕微動画計測; タンパク質運動; Ca; レセプター; 機能性人工細胞; 電子スイッチング; ホルモン合成; 薬物代謝応答; 光応答; チトクロ-ム Pー450; 時間分解分光計測

昨年度成功した人工細胞を用いて生物物理的解析を行って注目すべき解析結果が得られた。(1)精製した副腎皮質のチトクロムP-450(scc)+還元酵素系と、精製したチトクロムP-450(c21,17α)+還元酵素系を、リン脂質再構成膜に組み込んだ、ホルモン合成人工細胞を用いて蛋白回転運動計測や時間分解スペクトル計測を行い次の事柄が明らかにされた:アドレノドキシン・P-450(scc)とアドレノドキシン・還元酵素の2種類の複合体が衝突して電子が伝達されること。P-450(c21)は還元酵素と会合体を作るが、P-450(17α)は還元酵素と会合体を作らない。(小南、原、石村、川戸、吉川)(2)薬物代謝を行う肝臓チトクロムP-450II BやP-450I Aの人工改変体を遺伝子発現で酵母などの細胞に組み込むことで、信号ペプチドの配列がP-450の膜挿入に果たす役割を解析した。またアミノ酸を点変異させて還元酵素とP-450の静電的に相互作用していることを明らかにした。P-450の計算機による一時構造解析で、多くのP-450の膜貫通領域は1箇所くらいしかなく、膜に一部分埋没している部分の重要性が指摘された。(清水、大村、美宅)(3)顕微動画計測では以下のことが明らかになった:膜レセプターや膜蛋白の運動は、裏打ちの細胞骨格で作られたパッチ構造の中で制限された運動をしている。ウニの卵細胞の授精に伴って、Caの移動→繊毛の方向パターン変化→細胞内pHの変動が連続して起こる。免疫物質の刺激により細胞外CaがB細胞の核内にまで移動することを発見した。(楠見、木下、中西)(4)脂質の種類が異なると、膜内のチトクロムc3の存在状態が単量体と二量体の違いがあり電子伝達機構が異なることを見いだした。(阿久津)(5)ロドプシンの光化学サイクルの各中間体で蛋白の内部アミノ酸の配置変化を時間分解計測で見いだした。(津田、神山)。

Last year, the artificial cell successfully used the analysis of biophysics to pay attention to the results of the analysis. The main results are as follows: (1) P450 (scc) + meta-enzyme system, P-450 (c21 score 17 α) + meta-enzyme system, lipid membrane formation and tissue formation. The synthetic artificial cell was used to analyze the protein response time of the synthetic artificial cell, and the response time was broken down to determine the sequence of the event. P-450 (scc) was used as a template for the synthesis of synthetic artificial cells. The recombinant enzyme 2 was used as a template for the detection of recombinant DNA. The conjunctions of Pmur450 (c21) isozymes and Pmur450 (17 α) isozymes were used as conjunctions. (Xiao Nan, Yuan, Ishimura, Kawakawa, Yoshikawa) (2) the whole body was modified by P-450II B, Pmur450I and Yoshikawa. The results showed that the cell structure of yeast cells was improved, and the signal was used to cut the P450 membrane. The interaction of the enzyme Pmur450 silently in the presence of acid is known to be sensitive. Pmur450 computer simultaneity makes analysis system, multiplex PPUE 450 membrane communicates with each other in the field, and the part of the membrane is embedded in the device and the importance of the part is critical. (Shimizu, Omura, Meijia) (3) the following micro-motion drawing program shows that the membrane protein is activated, and the cell bone lattice is used as a control device in the production process. Oocyte insemination was accompanied by fertilization, and Ca was moved in the direction of fertilization and activation of intracellular pH kines.That started. The immunogens stimulated the migration of extracellular Ca

项目成果

Y.Ohta: "“Conversion of Cholesterol to Pregnenolone Mobilizes Cytochrome Pー450 in the Inner Membrane of Adrenocortical Mitochondria:Protein Rotation Study"" J.Biochem. 107. 97-104 (1990)

Y.Ohta：“胆固醇转化为孕烯醇酮动员肾上腺皮质线粒体内膜中的细胞色素 P-450：蛋白质旋转研究”J.Biochem. 107. 97-104 (1990)

Y.Ohta: "Dynamic Structures of Adrenocortical Cytochrome P-450 in Proteoliposomes and Microsomes:Protein Rotation Study" Biochemistry. 31. 12680-12687 (1992)

Y.Ohta：“脂蛋白体和微粒体中肾上腺皮质细胞色素 P-450 的动态结构：蛋白质旋转研究”生物化学。

Y.Ohta: "“Protein Rotation Study of Cytochrome Pー450 in Submitochondrial Particles:Effect of KCI and Intermolecular Interactions with Redox Partners"" J.Biochem. 109. 594-599 (1991)

Y.Ohta：“线粒体颗粒中细胞色素 P-450 的蛋白质旋转研究：KCI 的影响以及与氧化还原伙伴的分子间相互作用”，J.Biochem. 109. 594-599 (1991)

S.Ikushiro: "Adrenal P-450(scc) modulates activity of P-450(11β) in liposomal and mitochondrial membranes:Implication of P-450(scc) in zone specificity of aldosterone biosynthesis in bovine abrenal" J.Biol.Chem.267. 1464-1469 (1992)

S.Ikushiro：“肾上腺 P-450(scc) 调节脂质体和线粒体膜中 P-450(11β) 的活性：P-450(scc) 对牛 abrenal 醛固酮生物合成区域特异性的影响”J.Biol.Chem .267.1464-1469（1992）

T.Iwase: "“Rotation and Protein‐Protein Interactions of Genetically Expressed Cytochrome Pー450 in Yeast Microsomes"" Biochemistry. 30. 8347-8351 (1991)

T. Iwase：“酵母微粒体中基因表达的细胞色素 P-450 的旋转和蛋白质-蛋白质相互作用”，《生物化学》30. 8347-8351 (1991)。