タンパク質の細胞内局在化・機能発現と生体金属イオン

蛋白质和生物金属离子的亚细胞定位和功能表达

• 批准号: 08249232
• 负责人: 藤木 幸夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08249232/
• 关键词: ペルオキシソーム; ペルオキシソーム形成因子; RINGフィンガー; 亜鉛イオン; 蛋白質ー蛋白質間相互作用; 部位変異体; CHO変異細胞; ペルオキシソーム欠損症

ペルオキシソーム生合成には、14以上の遺伝子が必要とされる。我々は、ペルオキシソーム欠損性チャイニーズハムスター卵巣由来(CHO)細胞変異株のひとつZ65に対してペルオキシソーム形成を回復させる35kDaのペルオキシソーム形成因子-1(PAF-1)cDNAをクローニングした。PAF-1は、そのアミノ末端及びカルボキシ末端を細胞質側に向けた真在性膜蛋白質として、主にペルオキシソームに局在している。PAF-1は、新規に合成された蛋白質の膜透過装置の構成因子の一つである可能性が高い。さらに、PAF-1が現在までに10相補性群が報告されているヒトの遺伝性ペルオキシソーム欠損症の一つの相補性群であり、Zellweger症候群の病因遺伝子であることも初めて明らかにしている。PAF-1は、新規なシステインに富む亜鉛フィンガー、RINGフィンガー(モチーフC_3HC_4)をそのカルボキシル末端244残基から283残基に持っている。RINGフィンガーは、亜鉛や二価イオンを結合を介して特異的蛋白ー蛋白間相互作用に関係しているらしい。最近RINGフィンガーは、ペルオキシソーム形成因子だけでなく、シグナル伝達などの様々な細胞内機能に係る多くの蛋白質に見出されている。しかしながら、RINGフィンガーの機能的重要性については大きな謎のままである。今年度、我々はペルオキシソーム生合成におけるPAF-1のin vivoでの構造的、機能的研究をPAF-1の点変異および欠失変異体cDNAを構築し、それらをCHO変異細胞Z65に導入することにより行った。その結果、RINGフィンガーに保存されているシステイン及びヒスチジン残基の1点変異体(C247Y、C264S、H261W、C280S)および2点変異体(C280A,C283A)は、野生型同様の活性を有していた。しかしながら、他の2点変異体(C244A,C247A;C264S,C280S;C247S,C280S;H261W,C280S)は活性の低下していた。この現象は、PAF-1のRINGフィンガーの2つの亜鉛配位モチーフのうち、前半部分が重要でありなんらかの因子と相互作用している可能性が高いことを示している。

The number of children born in the family is 14 or more. We found that the 35kDa cDNA for PAF-1 (PAF-1) was recovered from the 35kDa cDNA for PAF-1 (PAF-1). PAF-1 is a protein that is present on the cytoplasmic side of the cell and is present on the cytoplasmic side of the cell. PAF-1 is highly likely to be a component of the membrane-permeable device that synthesizes the protein under the new regulations. In addition, PAF-1 is now present in 10 complementary groups, which are reported in the report. The genetic diversity of PAF-1 in Zellweger syndrome is a complementary group of PAF-1 in the report. PAF-1 is a new type of protein, which contains 244 residues and 283 residues at the end of the protein. Ring protein binding mediates specific protein-protein interactions. Recently, a number of proteins involved in intracellular functions have been identified in the production of RING proteins. The importance of the function of the RING This year, we will study the structure and function of PAF-1 in vivo, construct PAF-1 gene and introduce PAF-1 gene into CHO Z65 cells. As a result, the activity of the 1-point variant (C247Y, C264S, H261W, C280S) and 2-point variant (C280A, C283A) of the Ring-type and Ring-type residues was significantly higher than that of the wild type. 2 different species (C244A, C247A; C264S, C280S; C247S, C280S; H261W, C280S) are active. This phenomenon, PAF-1 Ring, 2 Lead coordination, the first half of the important factors interaction, the possibility of high

项目成果

Fujiki,Y.: "Approaches to Studies on Peroxisome Biogenesis and Human Peroxisome-deficient Disorders" Ann.N.Y.Acad.Sci.804. 491-501 (1996)

Fujiki,Y.：“过氧化物酶体生物发生和人类过氧化物酶体缺陷性疾病的研究方法”Ann.N.Y.Acad.Sci.804。

Shimozawa,N.: "A novel mutation,R125X in peroxisome assembly factor-1 responsible for Zellweger syndrome." Hum.Mut.(in press). (1997)

Shimozawa,N.：“过氧化物酶体组装因子 1 中的一种新突变 R125X 导致齐薇格综合征。”

Fujiki,Y.: "In Membrane Proteins: Structure,Function and Expression Control(Mihara,K.and Hamasaki,N.eds.)" Karger Press, 53-61 (1997)

Fujiki,Y.：“膜蛋白：结构、功能和表达控制（Mihara,K. 和 Hamasaki,N.eds.）” Karger Press，53-61 (1997)

Fujiki,Y.: "Peroxisome Biogenesis: Topogenic Signal,Peroxisome Assembly Factor,and Zellweger Syndrome.In Membrane Protein Transport(S.Rothman,ed.)" Advances in Modecular and Cell Biology, 213-219 (1996)

Fujiki,Y.：“过氧化物酶体生物发生：拓扑信号、过氧化物酶体组装因子和 Zellweger 综合征。膜蛋白转运（S.Rothman，编辑）”模式和细胞生物学进展，213-219（1996）

Tsukamoto,T.: "Isolation of a new peroxisome deficient CHO cell mutant defective in peroxisome targeting signal-1 receptor." Biochem.Biophys.230. 402-406 (1997)

Tsukamoto,T.：“分离出一种新的过氧化物酶体缺陷型 CHO 细胞突变体，该突变体在过氧化物酶体靶向信号 1 受体上存在缺陷。”