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ペルオキシン群の分子動態とペルオキシソーム形成および細胞機能の制御

过氧化物酶基团的分子动力学以及过氧化物酶体形成和细胞功能的调节

基本信息

批准号：
14037253
负责人：
藤木幸夫
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)PTS2レセプターPex7pの機能、機能不全、細胞内局在について、独自に分離したpex7CHO変異細胞ZPG207およびPEX7異常RCDP患者由来線維芽細胞を用いて検討した。PTS2およびPex5pLとの結合にはほぼ全長が必要であること、RCDP患者中現在までに報告されている3種の変異(L292ter, G217R, A218V)およびZPG207由来Pcx7p-W221terはいずれもPTS2およびPex5pLとの結合活性を失うことを見出した。さらにPex7pは細胞質に大半は存在するが、一部はPcx5pL依存的にペルオキシソームマトリックス内に局在化することから、Pex5pと同様にshuttling receptorとして機能しているものと結論した。2)先にクローニングした相補性群D群(欧米9群)のペルオキシソーム形成異常症原因遺伝子PEX16に関し、新たなZellwger症候群2患者の変異解析を行い、両者ともにexon10-skippingを引き起こす同じ変異(IVS10+2T->C)を見出した。3)従来、相補性群11群(PEX7障害性)CHO変異細胞はZPG207のみであったが、新たな変異細胞の分離へ向けたスクリーニングにより、2種のpex7変異細胞ZPEG227およびZPEG231の単離に成功、ZPEG227はPex7p-W158terを有していることを明らかにした。同様に、新たな表現型を示すpex2変異細胞ZPEG309を単離した。4)ペルオキシソームの膜アセンブリーに必須なPex16pのペルオキシソーム膜局在化シグナルを解明した。また、ペルオキシソームの増殖・分裂に関わるペルオキシン、Pex11pαおよびPex11pβに加えてPex11pγのクローニングにも成功した。5)長年不明であった相補性群A群(欧米8群)の相補遺伝子の解明を試み、CHO変異細胞ZPG167およびヒト腎臓cDNAライブラリーを用いた機能相補活性スクリーニング法により、ついに新規遺伝子PEX26のクローニングに成功した。さらに同相補性群NALD患者由来線維芽細胞に対してもPEX26はペルオキシソームの形成を回復させ、かつ患者PEX26遺伝子に変異を認めたことから、相補遺伝子はPEX26と結論した。これで、12の相補性群に分類されるペルオキシソーム形成異常症のすべての病因遺伝子が解明されたことになる。

1) PTS2-Pex7p function, dysfunction, intracellular localization, isolation of pex7CHO heterogenous cells ZPG207-PEX7 abnormal RCDP patients from line germ cell use. The binding activity of PTS2 and Pex 5 pL is necessary for the determination of the total binding activity of PTS2 and Pex5pL. Three different binding activities (L292ter, G217R, A218V) and ZPG207 are reported in RCDP patients. Pex7p is the same as Pcx5p. 2)First, the cause of abnormal syndrome formation in group D (group 9) of complementary sex group (group 9) is related to PEX16, and the analysis of different diseases in patients with Zellwger syndrome 2 is related to exon10-skipping, which leads to different diseases (IVS10+2T->C). 3) A new type of CHO heterotrophic cell was isolated from ZPG207 and ZPEG227 from PEX7-W158. The same and new phenotype was shown in pex2 and ZPEG309. 4) The solution to the problem of membrane separation must be Pex 16p. In addition, the selection of Pex11pα and Pex11p β is successful. 5)A new complementary gene PEX26 was successfully identified by the method of functional complementary activity in CHO variant ZPG167 and CHO variant ZPG167. In the same phase complementary group NALD patients from the line of cells, the PEX26 to the formation of a solution to restore, the PEX26 to the patient's genetic diversity to recognize, phase complementary to the PEX26 to conclude. These 12 complementary groups are classified into groups that form abnormalities, and the etiological factors that cause them are explained.