权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ペルオキシソーム形成因子群の膜インターフェイス機能と制御

膜界面功能和过氧化物酶体形成因子的调节

基本信息

批准号：
17048020
负责人：
藤木幸夫
金额：
$ 4.29万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は以下の研究項目に取り組み、分子レベルでの成果を得ることができた。1)Pex14pの機能領域と分子動態の解析膜局在ペルオキシンPex14pに関し、機能領域21-260の同定と共に、ペルオキシソーム膜上にてPex14p-Pex13p複合体として存在、PTS1タンパク質-Pex5p複合体をリクルートし、ついでPTS1タンパク質はペルオキシソーム膜内に取り込まれ、Pex5pは結合しているPex14p複合体から解離再び細胞質へとリサイクルされ、その後Pex14pは再び他のPex14pおよびPex13pと結合し複合体を形成することを見出した。2)ペルオキシソームの分裂・形態制御機構正常な球形ではなく繊維状に伸びたペルオキシソームを表現型とするCHO変異細胞ZP121では、その原因がダイナミン様タンパク質DLP1遺伝子の点突然変異によりGTPase活性を失ったことに起因すること、すなわちDLP1がペルオキシソームの形態形成にも関わっていること、ZP121が世界で初めての哺乳動物dlp1変異細胞であることを見出した。さらに、DLP1の膜上レセプターであるFis1もペルオキシソーム膜上に存在していることを見出した。この両者に、ペルオキシソームの分裂に必須なPex11pを加えた3者の協奏的作用により、ペルオキシソームの分裂と形態が制御されていることも最近明らかにした。3)Pex19pによるペルオキシソーム膜タンパク質の輸送と膜形成機構ペルオキシソーム膜タンパク質のPex19pによるin vitro局在化アッセイ系の確立に続いて、Pex19pは新規合成膜タンパク質と細胞質中で複合体を形成、安定化し,次いで経時的に膜形成に依存して輸送,局在化させることを、ペルオキシソーム膜欠損性pex19CHO変異細胞ZP119を用いて明らかにした。4)AAA ATPaseファミリーPex1pならびにPex6pとその複合体のペルオキシソームへのリクルーターPex26pとのダイナミズム解析Pex1pとPex6pのWalker motifs変異解析を含めた分子解剖とPex1p、Pex6pそれぞれの活性領域、さらには両者複合体形成必須領域を明らかにした。加えて、Pex26pとの3者複合体形成能とその生理的意義を明らかにした。また、細胞質のPex1pのオリゴマー体を検討、3量体ならびに6両体として存在することも見出した。新たな温度感受性pex1変異CHO細胞株の分離に成功した。5)PTS2受容体Pex7pによるマトリクスPTS2タンパク質の輸送機構PTS2タンパク質はPTS2受容体であるWD motif-rich Pex7pによって認識され、PTS1受容体Pex5pL依存的にペルオキシソームに輸送される。今回、活性を有するrecombinant Pex7pの発現と精製に成功、Pex5pL,輸送装置因子Pex14pやPex13pなどを用いて輸送各ステップの詳細を明らかにした。

This year, the following research projects have been selected and the results have been obtained. 1) Functional domain of Pex14p and molecular dynamics analysis of membrane structure in the selection of Pex14p, functional domain 21-260 of the same, selection of the same on the membrane, the existence of the Pex14p-Pex13p complex, PTS1 of the same, selection of the same on the membrane, PTS1 of the same on the same, selection of the Pex5p binds to Pex14p complex, dissociates from the cytoplasm, and then Pex 14p binds to other Pex14 p complexes. 2) The division and morphological control mechanism of CHO mutant cell ZP121 is normal, spherical, dimensional and phenotypic, and the causes of the sudden change in GTase activity are related to the loss of GTase activity and the causes of the morphological formation of CHO mutant cell ZP121. ZP121 is the first mammal in the world. The film on DLP1 is now in full swing. In this case, the division of the system must be Pex11p, plus 3, and the division of the system must be controlled. 3)Pex 19p is a new synthetic membrane. The membrane transport and membrane formation mechanism are dependent on the membrane transport and membrane formation mechanism. The membrane transport and membrane formation mechanism is dependent on the membrane transport and membrane formation mechanism. The membrane defect pex19CHO mutant ZP119 cells were used in the study. 4)AAA ATPases include Pex1p, Pex6p, and Pex26p, and Pex6p, and the molecular anatomy of the Pex1p and Pex6p is included in the analysis of the activity domain of the Pex 1p and Pex6p, and the domain necessary for the formation of the Pex6p complex is included in the analysis. The physiological significance of the formation of the complex of the three elements of Pex26 and Pex26 is clear. In addition, there are also three types of cells in the cytoplasm. Successful isolation of a new temperature-sensitive pex1 mutant CHO cell line 5) PTS2 receptor Pex7p, PTS2 substrate transport mechanism PTS1 receptor Pex5 pL-dependent substrate transport mechanism Now, the activity of the recombinant Pex7p has been successfully refined, Pex5pL, and the transport device factor Pex14p and Pex13p have been used.