高圧力によるヒト脳神経細胞の細胞死の研究

高压导致人脑神经细胞死亡的研究

• 批准号: 08256102
• 负责人: 高野 貴子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08256102/
• 关键词: 高圧力; 生存率; 細胞死; ネクローシス; アポトーシス; NB1

ヒト由来の培養細胞を用いて、高圧力による細胞死について以下の結果が得られた。使用した細胞は正常リンパ芽球(EB3)、B cell lymphoma cell line(Ramos)、Neuroblastoma cell line(NB1)等である。高圧発生装置は共同研究者が独自に開発した結晶解析用装置で、細胞を培養液中に浮遊させたままで、高圧かつ一定の温度管理下におくことができる。圧力処理の条件は、一定の圧力で30分間、37℃の加圧とした。1,EB3およびNB1の除圧直後の生細胞率は、85MPa以下の加圧では100%に保たれ、180-200MPaで0%になった。85MPaから200MPaの間では生細胞率は圧力増加に従ってSigmoidal curveを描いて減衰した。50%生細胞率は、約130-150MPaであった。2,除圧後CO_2インキュベータ-内で培養を継続し、継時変化を観察した。100MPa(EB3)と120MPa(NB1)の加圧後の場合はネクローシス細胞が漸増し、8時間後からアポトーシス細胞が出現し、以後16時間まで増加した。50MPa(EB3)の場合は除圧後アポトーシス細胞はみられず、細胞数の増加と細胞分裂が圧力処理後も起こっていた。圧力誘起アポトーシスは蛍光顕微鏡および電子顕微鏡による形態観察のほかTUNEL法により生化学的に検出した。3,高圧力処理によりDNA複製は顕著に障害され、細胞死を引き起こす圧力よりも低い圧力で障害された。4,Ramosの除圧直後の生細胞率は、25MPaまでは100%で、200MPaでは全部の細胞が死滅し、50%生存率は約100MPaであり、1より低かった。5,アポトーシスに関連する遺伝子産物の発現量を調べるために、p53,bcl-2,bcl-x_L,baxなどの抗体を用いてWestern blottingによる解析を行なっている。各細胞で発現量が異なり、現在加圧との関連を解析中である。

The following results were obtained from cell culture under medium and high pressure. Use of normal cell buds (EB3), B cell lymphoma cell line(Ramos), Neuroblastoma cell line(NB1), etc. The high pressure generator was developed independently by the co-researchers. The crystal analyzer was used for cell culture under high pressure and temperature control. Pressure treatment conditions are: a certain pressure for 30 minutes, 37℃ and pressure increase. 1,EB3 and NB1: The cell growth rate after depressurization is 100% at pressures below 85MPa and 0% at pressures between 180 and 200MPa. 85MPa to 200MPa, the growth rate increases, and the Sigmoidal curve decreases. 50% cell rate, about 130-150MPa. 2. CO_2-free internal culture after depressurization. After increasing the pressure between 100MPa(EB3) and 120MPa(NB1), the number of cells increased gradually, after 8 hours, the number of cells increased gradually, and after 16 hours, the number of cells increased gradually. 50MPa(EB3) after pressure treatment, the number of cells increased and the cell division began. Pressure induction, optical microscopy, electron microscopy, morphological observation, and TUNEL detection 3. DNA replication is impaired by high pressure treatment, cell death is impaired by low pressure treatment. 4,Ramos after removal of pressure cell survival rate is about 25MPa, 200 MPa, all cells die, 50% survival rate is about 100MPa, 1. 5, p53,bcl-2,bcl-x_L,bax antibodies were detected by Western blotting. Each cell is different in the amount of production, current pressure and correlation analysis.

项目成果

Kaoru J.Takano: "Development of an Optical Liquid High Pressure Cell and its Application to Visual Observation of Pressure-Driven Crystal Growth." Journal of Crystal Growth. 171. 591-601 (1997)

Kaoru J.Takano：“光学液体高压单元的开发及其在压力驱动晶体生长的视觉观察中的应用。”

Takako Takano: "Interstitial Deletion of Chromosome 1g[del(1)(q24q25.3)]Identified by Fluorescence In Situ Hybridization and Gene Dosaye Analysis of Apolipoprotein A-II,Coagulation Facter V,and Antithrombin III." American Journal of Medical Genetics. 68.

Takako Takano：“通过荧光原位杂交和载脂蛋白 A-II、凝血因子 V 和抗凝血酶 III 的基因 Dosaye 分析鉴定染色体 1g[del(1)(q24q25.3)] 的间质缺失。”

Kaoru J.Takano: "Effect of Hydrostatie Pressure on the Crystallization of Lysozyine Based on in situ Observation." Journal of Crystal Growth. 171. 554-557 (1997)

Kaoru J.Takano：“基于原位观察的静水压力对溶菌素结晶的影响”。

Takako Takano: "Assignment of the Dentatorubral and Pallidoluysian Atrophy・(DRPLA) Gene to 12p13.31 by Fluorescence in Situ Hybridization." Genomics. 32・1. 171-172 (1996)

Takako Takano：“通过荧光原位杂交将齿状红核和苍白球萎缩基因分配给 12p13.31” 171-172。

Takako Takano: "Assignment of Alzheimer's presenilin-1(PS-1)gene to 14q24,3 by fluorescence in situ hybridization." Neuroscience Letters. 214. 69-71 (1996)

Takako Takano：“通过荧光原位杂交将阿尔茨海默病 presenilin-1 (PS-1) 基因分配给 14q24,3。”