神経細胞死の制御要因としての可溶性カルシウム結合蛋白質

可溶性钙结合蛋白作为神经元细胞死亡的调节剂

基本信息

批准号：
08256219
负责人：
小倉明彦
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度の研究で、ある種の神経細胞の細胞質内に多量に存在する可溶性Ca結合蛋白の一種ヒポカルシンが、従来いわれているような、興奮に伴って細胞外から流入する「Caイオンの緩衝物質」としてではなく、より積極的に排出に関与する調節蛋白らしい、との知見をえた。これをさらに検証する目的で、ヒポカルシンを翻訳抑制遺伝子導入(ドミナントネガティブ)法で発現抑制する試みを開始した。しかし、神経細胞に外来遺伝子を導入することは従来の方法では困難であったので、いったん迂回して、まず向神経性ウィルスをベクターとして用いる技術の確立を目指した。限定増殖性にしたアデノウィルスに、βアクチンのプロモーターの支配下においたcDNAを組込み、これを初代培養海馬神経細胞に導入することに成功した。試みとして、その代謝産物が細胞死を誘発するとされるアミロイド前駆体蛋白(APP)を発現させたところ、興奮性伝達物質グルタミン酸への応答性が有意に増大した。APPの機能解析は本課題が当初掲げた目標ではないが、グルタミン酸感受性の調節は細胞内Ca代謝と直接関連するので、この解析を精密化して論文とした。現在、このアデノウィルスベクターを用いて、ヒポカルシンの発現抑制を試行中である。昨年度の研究で、損傷した脳の抽出物から新規神経栄養因子(脳損傷由来神経栄養因子;BINF)をえ、さらにBINFの断片13-merペプチド(BINP)が栄養因子活性を持つことを示した。この活性の機構を知るため、BINPを培養神経細胞に投与したところ、細胞内Ca濃度の変動なしに環状AMP濃度の上昇が誘発されることが観察された。また、海馬切片標本に投与すると、環状AMPアナログ投与の際に類似したシナプス伝達効率の漸増現象が観測された。したがって、BINPならびにBINFの栄養因子活性は、アデニル酸シクラーゼを介すると示唆される。現在、BINP受容体をえる目的で、BINP結合蛋白を精製中である。

在去年的一项研究中，我们发现低钙素是一种可溶性的CA结合蛋白，在某些神经元的细胞质中大量存在，是一种调节蛋白，是一种调控蛋白，而不是由于兴奋而导致的“ CA ION缓冲液”，而不是作为“ CA ION Buffer septrance”，而不是作为“ CA离子缓冲物质”。为了进一步验证这一点，我们发起了通过翻译抑制基因转移（主要阴性）来抑制低钙素表达的尝试。但是，由于常规方法很难将外源基因引入神经元，因此我们已经绕道了一段时间，并首先旨在建立一种使用神经蛋白病毒作为向量的技术。由β-肌动蛋白启动子控制的cDNA被掺入有限的增殖腺病毒中，并成功将其引入原代培养的海马神经元。为了尝试，代谢物表达淀粉样蛋白前体蛋白（APP），据说诱导细胞死亡，显着提高了其对兴奋性发射机谷氨酸的反应性。 APP的功能分析不是该主题设定的最初目标，但是由于谷氨酸敏感性的调节与细胞内CA代谢直接相关，因此该分析被完善并写为论文。目前，该腺病毒载体用于抑制降钙素的表达。去年的一项研究表明，新型的神经营养因子（脑损伤衍生的神经营养因子； BINF）是由受伤的脑提取物产生的，而BINF片段13-Mer肽（BINP）具有营养因子活性。为了理解这种活性的机制，观察到将BINP施用到培养的神经元时，循环AMP浓度的升高是在细胞内Ca浓度无变化的情况下诱导的。此外，当对海马截面样品进行施用时，当对环状AMP类似物进行施用时，观察到类似的突触传递效率现象。因此，有人提出，binps和binf的营养因子活性是由腺苷酸环化酶介导的。目前，为了获得BINP受体而纯化BINP结合蛋白。