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収縮輪に局在する新規細胞骨格蛋白Nedd5の解析

位于收缩环的新型细胞骨架蛋白 Nedd5 的分析

基本信息

批准号：
08259205
负责人：
木下専
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

出芽酵母およびショウジョウバエのseptinは収縮輪に局在するフィラメントの構成成分であり、その機能喪失型変異体は不完全な細胞質分裂により多核化することが知られている。研究代表者らは、本研究課題において、1)マウス胚神経系で高発現する遺伝子としてcDNAサブトラクション法により単離したNedd5が、septinファミリーに属し、特徴的なGTPaseドメインを有する41.5kDの蛋白をコードすることを示した。2)Nedd5がヒトおよびマウス細胞の収縮輪に局在し、抗Nedd5抗体の微小注入によりヒト癌細胞HeLaの細胞質分裂を阻害することを示した。3)Nedd5‐green fluorescent protein融合蛋白がanaphaseにおいて赤道部に帯状に局在し、細胞質分裂期に収縮輪近傍に濃縮し、さらにはmidbodyに局在することを、HeLa細胞における連続観察で確認した。GTPaseドメインに変異を導入し、GTP結合活性を欠くNedd5は、HeLa細胞において正常に局在しないのみならず、内在性Nedd5の分布も阻害することを示した。5)細胞質分裂において重要なアクチンやRhoと相互作用する可能性を探るため、これらの特異的阻害剤cytochalasin DまたはC3 toxinをHeLa細胞に作用させると、Nedd5が不規則に凝集するとともに、細胞質分裂が停止することを示した。以上より研究代表者らは、哺乳動物細胞の細胞質分裂におけるseptin、Nedd5の重要性を明らかにするとともに、分裂間期におけるNedd5に関しても興味深い知見を得た(投稿中Kinoshita et al. : A mammalian septin,Nedd5,is a novel cytoskeletal component interacting with rhoactin system.)。

Germinating yeast is a type of yeast that undergoes complete cytoplasmic division and is known to be polynuclear. The research representatives expressed their views on this research topic. 1) The high level of protein expression in embryonic nervous system and cDNA library method were discussed. 2) Nedd5, septin 5, and protein expression of 41.5 kD protein was demonstrated. 2) Nedd5 is a potent inhibitor of cytokinesis in HeLa cells, and microinjection of anti-Nedd5 antibodies inhibits cytokinesis in HeLa cells 3)Nedd5‐green fluorescent protein fusion protein was identified by anaphase analysis in equatorial region, cytoplasmic division in contraction cycle, midbody analysis in HeLa cells. GTP-binding activity is inhibited in HeLa cells due to the presence of GTP-binding protein. 5)The possibility of cytokinesis and Rho interaction was explored, and the specific inhibitor cytochalasin D and C3 toxin were shown to act on HeLa cells, and nedd5 was shown to stop cytokinesis. The importance of septin and Nedd5 in mammalian cytokinesis and in interphase Nedd5 is of great interest (Kinoshita et al. : A mammalian septin,Nedd5,is a novel cytoskeletal component interacting with rhoactin system.).