熱安定性を予測するパラメーターのランダム伸長変異による決定

通过随机延伸突变确定预测热稳定性的参数

• 批准号: 08272214
• 负责人: 四方 哲也
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08272214/
• 关键词: ランダム配列; 人工タンパク質

140アミノ酸からなるランダムポリペプチドのライブラリーを作った。これらは95残基のランダム配列と両末端の固定領域とから構成されている。これらのポリペプチド70種類のうち、約50%が大腸菌で発現可能で、約10%可溶性であった。このことは蛋白質の大腸菌内でのプロテアーゼなどに対する安定性や溶解性はポリペプチドの物性としてそれほどまれでないことを示している。精製した2つの可溶性ランダムポリペプチドは硫安に対してS字型の沈殿を示した。また、ある硫安濃度以上では熱処理によって沈殿が生じた。このことよりランダムポリペプチドでも疎水性コアと親水性表面を作っていると考えている。CDは2次構造がわずかしかないことを示した。また、沈降平衡法によるとモノマーとテトラマ-の平衡にあると解釈された。さらに微量ながらエステラーゼ活性があった。二つ異なる配列を持つ可溶性ランダムポリペプチドは異なる基質特異性を示した。このことはランダムポリペプチドの機能はゼロでなく、配列を人工的に変えれば進化させうることを示している。以上の結果は、程度の差はあるが、天然の蛋白質の性能はポリペプチドに見られるものであることを示す。また、蛋白質の初期進化において、数多くの配列の中から特別な配列が選ばれなくても進化し得ることを示している。この後はこのランダムポリペプチドを進化的な方法で天然の蛋白質に近づけていく。そして人工進化のどの段階で蛋白質のコンパクトさ、二次構造、高次構造が現れるを明らかにしたい。

140ア ノ ノ acid ダムポリペプチド らなるラ ダムポリペプチド ダムポリペプチド ラ ブラリ ブラリ を を を った is written as った. The <s:1> れら ラ 95 residue ラ ラ ダム ダム is arranged with と two terminal <s:1> fixed domains と ら ら ら to form されて されて る る. Youdaoplaceholder2 れら ポリペプチド70 species うち うち, about 50%が escherichia coli で present possible で, about 10% soluble であった. Within こ の こ と は protein の coliform で の プ ロ テ ア ー ゼ な ど に す seaborne る stability や solubility は ポ リ ペ プ チ ド の property と し て そ れ ほ ど ま れ で な い こ と を shown し て い る. Refined <s:1> た2 <s:1> <s:1> soluble ラ ダムポリペプチド ダムポリペプチド <s:1> thiamine に against <s:1> て S-shaped <s:1> didian を shows た た. Youdaoplaceholder0, ある thiamine concentration above で で thermal treatment によって Shen dian が sheng じた. こ の こ と よ り ラ ン ダ ム ポ リ ペ プ チ ド で も 疎 water-based コ ア と hydrophilic surface を as っ て い る と exam え て い る. The quadratic construction of CD た がわず た な な な とを とを とを shows た た. Youdaoplaceholder0, descending equilibrium method によるとモノ とテトラ とテトラ とテトラ また - <s:1> equilibrium にあると solution された. Youdaoplaceholder0 trace amount ながらエステラ ゼ ゼ activity があった. Two <s:1> different なる are combined with を to hold <s:1> soluble ラ ラ ダムポリペプチド different なる matrix-specific を to show た た. こ の こ と は ラ ン ダ ム ポ リ ペ プ チ ド の function は ゼ ロ で な く, column を artificial に - え れ ば evolution さ せ う る こ と を shown し て い る. The above <s:1> results <e:1>, degree <s:1> difference <e:1> あるが, and natural <s:1> protein <s:1> performance <e:1> ポリペプチドに can be found in られる <s:1> <s:1> である である とを とを とを とを とを とを す. ま た, protein の early evolutionary に お い て, more く の match listed の か ら special な match column が choose ば れ な く て も し evolution to る こ と を shown し て い る. The な method for the evolution of な で post-ラ ダムポリペプチドを ダムポリペプチドを で natural <s:1> protein に is close to づけて く く く. そ し て artificial evolution の ど の Duan Jie で protein の コ ン パ ク ト さ, secondary structure, higher order structure が now れ る を Ming ら か に し た い.

项目成果

Prijambada I.D.et al.: "Solubility of artificial proteins with random sequences" FEBS-Lett.382. 21-25 (1996)

Prijambada I.D.等人：“具有随机序列的人工蛋白质的溶解度”FEBS-Lett.382。

Suga Y.et al.: "Heme content of Catalase I from Bacillus stearothermophilus" J.Ferment.Bioeng.81・3. 259-261 (1996)

Suga Y.等人：“来自嗜热脂肪芽孢杆菌的过氧化氢酶I的血红素含量”J.Ferment.Bioeng.81・3（1996）。