細胞内増殖機構における蛋白質リン酸化酵素PKNの機能に関する研究

蛋白激酶PKN在细胞内增殖机制中的作用研究

• 批准号: 08265239
• 负责人: 小野 功貴
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08265239/
• 关键词: 蛋白質リン酸化酵素; PKN; 細胞内情報伝達機構

本研究においては、PKNと直接的、間接的に相互作用することによりシグナリングを制御している分子の同定を種々の方法を用いて行い、既知のシグナリング分子との関連も含めて、複雑なシグナリングネットワークの解明の一助とすることを目指した。以下に、得られた結果の概略を記す。1.PKNと低分子量GTP結合蛋白質Rhoとの相互作用に関する解析細胞骨格の構築に重要な役割を担っていると考えられる低分子量GTP結合蛋白質PhoがPKNと直接GTP依存的に結合し、PKNの活性化を引き起こすことを示し、Rhoの標的蛋白質の一つとしてPKNが機能している可能性を示した。PKNとRhoの結合について、酵母Two hybrid systemなどを用いて詳細に検討した結果、Rhoとの結合にはPKNのアミノ末端側領域中に存在するロイシンジッパー様配列が重要であることを明かにした。2.PKNと相互作用する蛋白質の解析PKNと相互作用する蛋白質を酵母Two hybrid systemによりスクリーニングすることにより中間径フィラメントであるニューロフィラメントとPKNは直接結合し、またこれをリン酸化することによりニューロフィラメントの結合、脱重合を制御していることを示した。さらに他の中間径フィラメントであるビメンチンともPKNは結合することから、PKNはこれら中間径フィラメントのダイナミックな動きを制御している可能性が示唆された。また、上記と同様な方法で、細胞骨格蛋白質アクチンの重合に重要な機能を持っているα-アクチニンともPKNが直接結合することを示し、その結合領域、結合様式などを詳細に検討した。3.PKNの細胞内局在に関する解析PKNに対する特異抗体を用いてPKNの細胞内局在について解析したところ、通常の状態ではPKNは細胞質中に存在するのに対して、熱などのストレスにより速やかに核に移行することが明かとなり、PKNは、遺伝子発現制御を含む核内でのイベントにも何らかの機能を持っている事が示唆された。

This study に お い て は and PKN と に of direct and indirect interactions す る こ と に よ り シ グ ナ リ ン グ を suppression し て い の る molecules with fixed を kind 々 の way を with い て い, both known の シ グ ナ リ ン グ molecular と の masato even も containing め て, complex 雑 な シ グ ナ リ ン グ ネ ッ ト ワ ー ク の interpret の on help と す る こ と を refers し た. The following に and the resulting られた are roughly を and denoted as す. 1. PKN と low molecular weight GTP binding protein made Rho と の interaction に masato す る resolution cell bone の build に cut を bear important な service っ て い る と exam え ら れ る low molecular weight GTP binding protein made Pho が PKN と GTP dependent に combined し made directly and PKN の activeness を lead き up こ す こ と を し, Rho の の target protein A と と てPKNが function <s:1> て る る possibility を indicates た た. PKN と Rho の combining に つ い て, yeast Two hybrid system な ど を with い て detailed に beg し 検 た results, Rho と の combining に は PKN の ア ミ ノ に exist in the field of end side す る ロ イ シ ン ジ ッ パ ー others go が important で あ る こ と を Ming か に し た. 2.PKNと interaction する Protein <s:1> analysis PKNと interaction する protein を yeast Two hybrid System に よ り ス ク リ ー ニ ン グ す る こ と に よ り middle diameter フ ィ ラ メ ン ト で あ る ニ ュ ー ロ フ ィ ラ メ ン ト と PKN は directly combining し, ま た こ れ を リ ン acidification す る こ と に よ り ニ ュ ー ロ フ ィ ラ メ ン ト の combination, overlapping を suppression し て い る こ と を shown し た. さ ら に he の middle diameter フ ィ ラ メ ン ト で あ る ビ メ ン チ ン と も PKN は combining す る こ と か ら and PKN は こ れ ら middle diameter フ ィ ラ メ ン ト の ダ イ ナ ミ ッ ク な dynamic き を suppression し て い が る possibility in stopping さ れ た. ま た, written と with others で な method, cell skeleton protein ア ク チ ン の overlap に important function of な を hold っ て い る alpha ア ク チ ニ ン と も PKN が directly combined す る こ と を し, そ の combining field, combined with others in な ど を detailed に beg し 検 た. 3. PKN の cells inside bureau in に masato す る parsing PKN に す seaborne を る specific antibody with い て PKN の cells inside bureau in に つ い て parsing し た と こ ろ, usually の で は PKN は に exists in cytoplasm す る の に し seaborne て, hot な ど の ス ト レ ス に よ り speed や か に nuclear に transitional す る こ と が Ming か と な り and PKN は, but 伝 発 system now Royal を containing む intranuclear で の イ ベ ン ト に も what ら か の function を hold っ て い が る things in business さ れ た.

项目成果

Watanabe,G.: "Protein kinase N (PKN) and PKN-related protein Rhophilin as targets of small GTPase Pho." Science. 271. 645-648 (1996)

Watanabe,G.：“蛋白激酶 N (PKN) 和 PKN 相关蛋白 Rhophilin 作为小 GTPase Pho 的靶标。”

Mukai,H.: "PKN associates and phosphorylates the head-rod domaine of neurofilament protein" J.Biol.Chem.271. 9816-9822 (1996)

Mukai,H.：“PKN 关联并磷酸化神经丝蛋白的头杆结构域”J.Biol.Chem.271。

Amano,M.: "Identification of a putative target for Rho as the serine-threonine kinase,PKN." Science. 271. 648-650 (1996)

Amano,M.：“确定 Rho 的假定靶标为丝氨酸-苏氨酸激酶 PKN。”

Kitagawa,M.: "The role of the unique motifs in the amino-terminal region of PKN on its enzymatic activity." Biochem.Biophys.Res.Commun.220. 963-968 (1996)

Kitakawa,M.：“PKN 氨基末端区域的独特基序对其酶活性的作用。”

Mukai,H.: "Translocation of PKN from the cytosol to the nucleus induced by stresses." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 93. 10195-10199 (1996)

Mukai,H.：“应激诱导 PKN 从细胞质转移到细胞核。”