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テトラサイクリン/プロトンアンチポ-タの結晶化とX線構造解析

テトラサイクリン/プロトンアンチポ-タの結晶化とX線構造解析
四环素/质子反向转运蛋白的结晶和X射线结构分析
批准号：
08268224
负责人：
三木 邦夫
金额：
$1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1996 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08268224/
关键词：
細胞膜輸送アンチポ-タテトラサイクリン結晶化X線構造解析タンパク質結晶学

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项目成果

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本研究は,細胞膜輸送の分子機構を原始レベルで解明することを目的として,テトラサイクリン/プロトンアンチポ-タ(TetAタンパク質)の結晶化とX線結晶構造解析を行い,その完全な三次元立体構造を決定するものである.今年度は,引き続きテトラサイクリン耐性の強いグラム陰性菌のTetAタンパク質(分子量42kDa,アミノ酸残基数401),タンパク質の親水性部分を増加させたタンパク質(デヒドロ葉酸還元酵素(DHFR)をTetAタンパク質のN末端に融合させたタンパク質)を研究の対象として結晶化条件の検索を行ってきた.その結果,界面活性剤としてドデシルマルトシド,沈殿剤としてポリエチレングリコール‐モノメチルエーテル550,添加剤に硫酸亜鉛を用い,温度20度,pH6.5で結晶化を行ったとき,1辺の長さが約0.15mmの板状結晶が得られた.本結晶は,蒸気拡散でアモルファス沈殿状になったタンパク質溶液の中から析出したものである.回転対陰極型のX線発生装置を用いてX線回析実験を行い静止写真を数枚撮影したところ,低分解能の反射を確認できた.この反射が由来する面間隔は約40Aであり,低分子結晶由来の反射と比べると少々大きなものであったが,それがTetAタンパク質由来のものであるかどうかの判断はできなかった.この結晶は結晶化の再現性に乏しいため,新たな結晶化条件の検索に加えて結晶化の再現性を高めることが今後の重要な課題である.
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会议论文
放射光と中性子の連携利用による電子伝達タンパク質の精密構造解析
  • 批准号：
    20K06523
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 资助金额：
    $2.75万
  • 财政年份：
    2020
  • 负责人：
    三木 邦夫
  • 依托单位：
    Kyoto University
DnaK分子シヤペロンによるDNA複製開始タンパク質の活性化過程の解明
  • 批准号：
    17028029
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $3.2万
  • 财政年份：
    2005
  • 负责人：
    三木 邦夫
  • 依托单位：
    Kyoto University
分子シャペロンによるDNA複製開始タンパク質(RepE)の活性化の分子機構:repE遺伝子の転写、翻訳、活性化過程におけるシャペロンの働きとRepE-シャペロン複合体の構造解析
  • 批准号：
    15032223
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $4.22万
  • 财政年份：
    2003
  • 负责人：
    三木 邦夫
  • 依托单位：
    Kyoto University
高エネルギーX線によるXe,Csを用いた多波長異常分散(MAD)法
  • 批准号：
    14658216
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 资助金额：
    $2.43万
  • 财政年份：
    2002
  • 负责人：
    三木 邦夫
  • 依托单位：
    Kyoto University
海外基金