生殖細胞における染色体テロメアの機能構造の解析

生殖细胞染色体端粒功能结构分析

• 批准号: 08275213
• 负责人: 石川 冬木
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08275213/
• 关键词: テロメレース; TLP1; テトラヒメナp80; 始原生殖細胞

我々はPCRを応用した高感度かつ定量的なテロメレース活性の検出方法を独自に解析し、テロメレースのDNA合成酵素としてのprocessivityをはじめとする生化学的解析を行ってきた。その結果、非常に高純度のヒトテロメレースを純化精製することに成功した。一方、テトラヒメナ・テロメレースのp80蛋白質配列を用いたデータベースサーチから、最近、テロメレースを構成する蛋白質の一成分のcDNAクローンを世界ではじめて単離することに成功した。このcDNAクローンの構造解析により、約2,800アミノ酸をコードするopen reading frameが同定された。部分的なリコンビナント蛋白質を大腸菌で発現させ、ウサギを用いてポリクローナル抗体を得た。この抗体は、ウエスタンブロッティングおよび免疫沈降により、SDS-PAGE上、約260 kDの分子量に相当する泳動度を示す蛋白質を同定した。蛋白質精製に用いた複数のクロマトグラフィーの画分の検討により、この蛋白質の存在と活性の溶出パターンは完全に一致した。さらに、抗体を用いた免疫沈降物にはテロメレース活性を検出することができた。以上のことより、我々は、クローン化したcDNAは、テロメレースを構成する蛋白質の一つであると結論し、TLP1(telomerase protein 1)と名付けた。次に、熊本大学阿部訓也助教授との共同研究により、マウス初期胚に見られる始原生殖細胞のテロメレース活性を検討するために、アルカリフォスファターゼ-lacZ癒合遺伝子のトランスジェニックマウスより得られた精製始原生殖細胞について検討したところ、意外なことに周囲組織の初期胚細胞よりも低い値を示した。現在、TLP1蛋白質の有無について解析中である。

We use PCR to determine the sensitivity and activity of DNA synthesis enzymes and to determine the biochemical analysis of DNA synthesis enzymes. The result was a very high purity product. The p80 protein sequence was successfully mapped to the cDNA sequence, a component of protein, in the world. The structure of the cDNA library was analyzed and approximately 2,800 amino acids were added to the open reading frame Some of the proteins in E. coli were found in E. coli, and some of the antibodies were found in E. coli. The antibody was identified by SDS-PAGE with a molecular weight of about 260 kD and a relative mobility of protein. Protein purification is carried out in a manner consistent with the analysis of protein composition, the existence and activity of protein. In addition, the antibody is used in the immune system. The above results show that TLP1(telomerase protein 1) is a protein that is composed of cDNA and telomerase protein. In addition, Assistant Professor Nobuya Abe of Kumamoto University conducted a joint study on the activity of embryonic germ cells in the early embryo stage. The results showed that the activity of embryonic germ cells in the early embryo stage was low. Now, TLP1 protein and whether there is a problem in the analysis.

项目成果

Ishikawa,F.: "A review article:Telomere crisis,the driving force in cancer cell evolution." Biochem.Biophys.Res.Commun.230. 1-6 (1997)

Ishikawa,F.：“一篇评论文章：端粒危机，癌细胞进化的驱动力。”

Tatematsu,K.: "A novel quantitative“stretch PCR assay",that detects a dramatic increase in telomerase activity during the progression of myeloid leukemias." Oncogene. 13. 2265-2274 (1996)

Tatematsu, K.：“一种新颖的定量“延伸 PCR 测定”，可检测骨髓性白血病进展过程中端粒酶活性的显着增加。”Oncogene。

Nakayama,J.: "TLP1:A gene encoding a protein component of mammalian telomerase is a novel member of WD-repeats family." Cell,in press. (1997)

Nakayama, J.：“TLP1：编码哺乳动物端粒酶蛋白质成分的基因是 WD 重复序列家族的新成员。”

Ishikawa,F.: "A review article:Telomere crisis in leukemia." Intl.Hematol.in press. (1997)

Ishikawa,F.：“一篇评论文章：白血病的端粒危机。”