ヒトセントロメア蛋白質CENP-Aの機能解析

人着丝粒蛋白CENP-A的功能分析

• 批准号: 08277213
• 负责人: 依田 欣哉
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08277213/
• 关键词: ヒト染色体; セントロメア; CENP-A; ヒストンH3; ヌクレオソーム; CENPB; α-サテライトDNA; DNA; コアヒストン複合体

ヒト細胞染色体におけるセントロメア領域の機能が高頻度反復配列(αサテライトDNA)と一連のセントロメア蛋白質(コアヒストン、CENP-A、CENP-B等)との複合体を基礎とする繰返し構造にある可能性を追求している。本研究計画においては特にCENP-Aの機能解析に焦点を絞り解析を行っている。最近CENP-A遺伝子がクローン化されその塩基配列からヒストンH3に類似であることが予想された。我々はHeLa細胞由来ヒストンH2A、H2B、H3、H4およびCENP-Aを高純度に精製しヌクレオソーム構造再構成系を確率し、CENP-AがヒストンH3としてのヌクレオソーム形成活性を持つことを示した(論文準備中)。故にCENP-Aは遺伝子構造及び機能的にセントロメア特異的ヒストンH3であるとう事ができる。出芽酵母の系では染色体の分離分配に必須なヒストンH3類似の遺伝子(CSE4)が単離された。これらの知見はセントロメア領域にセントロメア機能を規定する特異的なヌクレオソーム構造の存在を示唆している。以上の知見を基礎に本年度はDNAと蛋白質との相互作用の観点から解析を行うために必須であるCENP-A抗体の作製を行った。大腸菌を用いた融合蛋白発現系によりCENP-Aタンパク質を発現し精製した。CENP-Aペプチドを数種類マウスマウスに免疫し、そのうちのいくつかがCENP-A抗体を産生することを確認した。今後モノクローン抗体を作製する予定である。

The function of the chromosome region of the cell is to pursue the possibility of a complex of highly frequent repeated alignment (α-DNA) and sequential chromosome proteins (α-DNA, CENP-A, CENP-B, etc.) as the basis for the structure of the chromosome. This research project focuses on CENP-A function analysis. Recently CENP-A has been updated to include the following information: In this paper, we present a method for determining the structural reconstitutions of HeLa cells from H2A, H2B, H3, H4 and CENP-A with high purity, CENP-A from H3 and CENP-A from H2A to H4 (in preparation). Therefore, CENP-A has a unique structure and function. In budding yeast strains, segregation and distribution of chromosomes are essential for the isolation of H3-like genes (CSE4). This knowledge is used to specify the presence of a specific "software" structure in the "software" field. This year, the study of CENP-A antibody production was carried out. E. coli fusion protein development system: CENP-A fusion protein development and purification CENP-A antibody production is confirmed by the number of types In the future, the antibody production will be determined.

项目成果

依田欣哉、岡崎恒子: "Centromere Specific Nucleosome Structures in Human Cells" Keystone Symposium on Functional Organization of the Nucleus. (印刷中). (1997)

Kinya Yoda，Tsuneko Okazaki：“人类细胞中着丝粒特异性核小体结构”关于细胞核功能组织的基石研讨会（正在出版）。

岡崎、舛本、北川、池野、依田 等: "Properties and Interaction of cENPB and Centromere Satellite DNA in Mammalian Cells" Angelo Abbondandolo,BK.Vig and R.Roi(eds),Chromosome Segregation and Anenploucly IV. (印刷中). (1997)

Okazaki、Masumoto、Kitakawa、Ikeno、Yoda 等：“哺乳动物细胞中 cENPB 和着丝粒卫星 DNA 的特性和相互作用”Angelo Abbondandolo，BK Vig 和 R. Roi（编辑），染色体分离和 Anenploucly IV（出版中） ）（1997）。

網代,依田 等: "Alteration of Cell Cycle-dependent Histone Phosphorylations by Okadaic Acid. Induction of Mitosis Specific H3 Phosphorylation and Chromatir Condensation in Meminelian Intephari Cells" Journal of Biological Chemistry. 271. 13197-13201 (1996)

Ajiro、Yoda 等人：“冈田酸改变细胞周期依赖性组蛋白磷酸化。Meminelian Intephari 细胞中诱导有丝分裂特异性 H3 磷酸化和染色质缩合”《生物化学杂志》271。13197-13201 (1996)。

依田欣哉 等: "CENfromere Protein B of African Green Monkey Cells : Gene Structure,Cellular Expression,and Contromene Localization" Molecular and Cellular Biology. 16・9. 5169-5177 (1996)

Kinya Yoda 等人：“非洲绿猴细胞的 CENfromere 蛋白 B：基因结构、细胞表达和 Contromene 定位”分子和细胞生物学 16・9（1996）。

依田欣哉、岡崎恒子: "Site Specific Base Peletions in Humanα-Satellite Momer DNAs Are Associated with Regulerly Distributed CENP-B Boses 1" Chromosome Research. (印刷中). (1997)

Kinya Yoda、Tsuneko Okazaki：“人类 α-卫星母体 DNA 中的位点特异性碱基片段与规则分布的 CENP-B Boses 1 相关”染色体研究（1997 年）。