ヒトセントロメア領域特異的ヌクレオソーム構造が形成する高次構造体の解析

人类着丝粒区域特异性核小体结构形成的高阶结构分析

• 批准号: 09263206
• 负责人: 依田 欣哉
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09263206/
• 关键词: CENP-A; ヌクレオソーム; モノクローン抗体; セントロメア

ヒト細胞由来セントロメアDNA(αサテライト)及びセントロメア蛋白CENP-A,CENP-Bを用いたin vitro再構成実験によって得られた結果から我々はセントロメア特異的ヌクレオソーム構造の存在を提唱している。この構造を基礎として形成される高次構造体がセントロメア機能に関わるものと推測している。セントロメア特異生とは次の3点である。(1)セントロメア特異的ヒストンH3=CENP-Aの関与、(2)ヌクレオソーム構造のボジショニング:1ヌクレオソームユニットが1αサテライトユニット(171bp)に対応していることを示した。(3)CENP-Bboxを持つaサテライトDNAの規則性:HeLa細胞において大部分のCENP-Bboxが二回に一回規則的に繰返し出現していることを示した。我々は現在Woodcock等によって提唱されているzig-zag nucleosomal ribbon構造に注目している。このモデルにヌクレオソーム構造のポジショニングという条件を当てはめると極めて特異的な構造、しかも繰返しDNA配列を反映した規則性を持つ高次構造の成立を容易に想像する事ができる。以上の作業仮説を実証し高次構造の規則性を検証し、さらにセントロメア機能との関わりを解析する目的で、我々はさらに大量かつ高純度のセントロメア蛋白質の精製を試みた。大腸菌を用いたタンパク質発現系を利用してCENP-Aを精製する事ができた。しかし精製されたCENP-Aは細胞由来CENP-Aとは明かにSDS-PAGEにおける移動度が異なり、翻訳後の修飾が異なることを予想させる結果であった。そこでバキュロヴィールスによる発現系を用いて真核生物の修飾基の存在するCENP-Aの発現精製を試み成功した。さらCENP-B及びCENP-Cについても同じ発現系を用いて調整する予定である。また極めて特異性の高い抗CENP-Aモノクローン抗体の作製に成功した。

Cell origin DNA(α-protein) and protein CENP-A,CENP-B are used in vitro to reconstitute the cell. The structure foundation and formation of higher-order structures are related to the function of the structure. 3 points to go. (1)The difference between the two is that H3=CENP-A is related to (2) the structure of the software:1) the software is related to (171bp) the structure of the software. (3) CENP-B box maintains a regular pattern of DNA:HeLa cells are in the middle of most CENP-B boxes with a two-loop regular pattern. I am now Woodcock et al., and I am looking forward to the zig-zag nuclear ribbon structure. The structure of this kind of structure is easy to imagine when the structure of this kind of structure is very special, and the DNA alignment is regular. The above work is carried out to verify the regularity of high-order structure, and to analyze the relationship between high purity protein and high purity protein. E. coli is used in the purification of protein by CENP-A. CENP-A cell origin CENP-A cell origin CENP-A The CENP-A gene was successfully purified by using the eukaryotic modifier gene. CENP-B and CENP-C are used to adjust the system. The production of highly specific anti-CENP-A antibodies was successful.

项目成果

安藤覚, 依田欣哉: "ヒトCENP-Aに対するモノクローナル抗体の作製" 第20回日本分子生物学年会抄録. (1997)

Satoru Ando，Kinya Yoda：“抗人CENP-A单克隆抗体的制备”第20届日本分子生物学年会摘要（1997）。

依田欣哉: "セントロメア特異的ヌクレオソーム構造(ヒトセントロメア特異的ヒストンH3=CENP-Aの解析)" 第30回日本細胞生物学会大会抄録. (1997)

Kinya Yoda：“着丝粒特异性核小体结构（人类着丝粒特异性组蛋白 H3=CENP-A 的分析）”日本细胞生物学学会第 30 届年会摘要（1997 年）。

依田欣哉: "ヒトセントロメア領域特異的ヌクレオソーム構造が形成する高次構造体の解析" 第20回日本分子生物学会年会抄録. (1997)

Kinya Yoda：“人类着丝粒区域特异性核小体结构形成的高阶结构的分析”日本分子生物学会第 20 届年会摘要（1997 年）。

Kinya Yoda et al.: "Site-specific base deletions in human α-satellite monomer DNA are associated with regularly distributed CENP-B boses" Chromosome Research. 5. 207-211 (1997)

Kinya Yoda 等人：“人类 α-卫星单体 DNA 中的位点特异性碱基缺失与规则分布的 CENP-B 基因相关”，《染色体研究》5. 207-211 (1997)。

Kinya Yoda: "Centromere specific nucleosome structures human cell" Keystone Symposium on Functional Organization of the Nucleus. 40-40 (1997)

Kinya Yoda：“着丝粒特异性核小体结构人类细胞”关于细胞核功能组织的基石研讨会。