ヒト染色体セントロメア領域で形成されるヌクレオソーム構造のポジショニング

人类染色体着丝粒区域形成的核小体结构的定位

• 批准号: 06680681
• 负责人: 依田 欣哉
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680681/
• 关键词: セントロメア; CENP-B; CENP-B box; DNA複合体; ヌクレオソーム構造; α-サテライトDNA; ヌクレオソーム構造のポジショニング; セントロメア特異的高次構造

巨大な繰返し配列を持つヒトセントロメア領域DNAとDNA結合蛋白との相互作用により形成される高次基本構造の解析を行った。私はこれまでに、Hela 細胞から精製したCENP-BとCENP-B box配列との相互作用により形成されるCENP-B・DNA複合体の構造解析を行いCENP-Bが長いDNA(^〜3.5 kbp)との相互作用においても二量体を維持しDNAを"束ねる"機能を持つこと、CENP-B・DNA複合他とコアヒストンを用いNAP-1存在下にヌクレオソーム形成を行い、CENP-Bがヌクレオソーム構造のポジショニングを引き起こすこと、を見いだした。そこでvivoにおけるヌクレオソーム構造を調べるためにCENP-B box配列をprimerとしてPCR-primer伸長法により直接塩基配列決定を試みた。驚いたことに塩基配列が明瞭に読め、CENP-B boxが主として塩基配列及び単位長のよく保存された2merを繰返し単位とするα-サテライトDNA上にあり、セントロメア領域に2mer毎に一回繰り返して存在することが明らかとなった。この知見はCENP-B・CENP-Bbox相互作用によって形成される複合体の構造を考察する上で重要である。MNase Footprint 解析を行いin vitroデータとの比較から(i)セントロメア領域上のCENP-B boxに実際CENP-Bが結合していること、(ii)ヌクレオソーム構造がin vitroと同様にポジショニングしていることを見いだした。以上の結果から我々は、セントロメア領域の繰返し配列では規則的なヌクレオソーム構造を形成し、セントロメア特異的な高次構造形成に寄与しているものと推定している。

The interaction between DNA and DNA-binding protein in the formation of a large number of molecules and the analysis of high-order basic structures CENP-B and CENP-B box alignment and interaction in Hela cells were refined to form CENP-B and DNA complexes.(^~ 3.5 kbp) The interaction between the two molecules maintains the DNA "bundle" function, CENP-B·DNA complex and its use in the presence of NAP-1, CENP-B complex and its structure. The CENP-B box alignment primer and PCR-primer elongation method were used to determine the direct alignment of the CENP-B box. The CENP-B box contains the main base, the main base, and the unit length. The 2mer is separated from the unit length. The α-base DNA is separated from the unit length. The 2mer is separated from the unit length. This knowledge is important for investigating the structure of the CENP-B·CENP-B box interaction. MNase Footprint Analysis: (i) CENP-B box in the field, and (ii) CENP-B structure in the field. The above results show that the formation of regular structures and the formation of special high-order structures are related to the evolution of the structure.

项目成果

依田欽哉、岡崎恒子: "CENP-B box配列のαサテライトDNA上での存在様式" 日本分子生物学会年会要旨集. 4-2B-246 (1994)

Kinya Yoda、Tsuneko Okazaki：“α-卫星 DNA 上 CENP-B 盒序列的存在模式”日本分子生物学会年会记录 4-2B-246 (1994)。

K.Yoda and T.Okazaki: "CENP-B Causes Nucleosome Positioning on α-Satellite DNA in the Centromere Region of human chromosome" Cold Spring Harbor Meeting "The Cell Cycle". (1994)

K. Yoda 和 T. Okazaki：“CENP-B 导致人类染色体着丝粒区域 α-卫星 DNA 上的核小体定位”冷泉港会议“细胞周期”(1994)。

依田欽哉、奥田明日子、岡崎恒子: "セントロメア領域におけるDNAと蛋白質の相互作用" 日本分子生物学会年会要旨集. 2F-7 (1994)

Kinya Yoda、Akiko Okuda、Tsuneko Okazaki：“着丝粒区域 DNA 和蛋白质之间的相互作用”日本分子生物学会年会记录 2F-7 (1994)。