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NMRによるリゾチーム非天然構造の比較

通过 NMR 比较溶菌酶非天然结构

基本信息

批准号：
09261209
负责人：
藤原敏道
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Yokohama National University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リゾチームはもっともよく研究されているタンパク質のひとつである。そのために、タンパク質のフォールデリングのメカニズムや安定性の研究が広く行われている。特に、構造の安定性を熱力学的に議論する場合には天然構造と共に変性構造を知る必要がある。円偏光二色性による研究から同じ変性状態でも温度変性とグアニジン変性では二次構造が異なることが示唆されていた。そこで本研究では、このような変性構造の違いをNMRを用いて明らかにするために、交換の遅いNHのNMRシグナルを定量的に解析することで卵白リゾチームの塩酸グアニジン変性状態について検討した。実験では、卵白リゾチームと塩酸グアニジンを別々に重水素化する。次に、pHを調整した塩酸グアニジン重水溶液を作り、氷水で冷やしながら卵白リゾチームを溶かし試料とした。NMR測定はブルカ-DMX600を主に用いた。HD交換速度を測定するために、一定時間6Mグアニジン塩酸で変性させた。この後、急速に大量の重水を加えて塩酸グアニジンを透析で除き、シグナル分離がよくなる天然状態にして2次元NOESYスペクトルを測定した。実験の結果、6M塩酸グアニジン中10℃では、リゾチームは変性しているのにかかわらずHD交換速度がきわめて遅いものがあった。そのうちで遅いNHの交換速度は、一次構造やpH、温度、変性剤濃度を考慮したランダムコイルでの交換速度に比べて約10倍遅かった。この遅い部位は、残基番号50,60,65と90近辺にあった。プロテクションファクターとしては、尿素、温度、酸変性より数倍大きい値になった。特にCDスペクトルが似ている尿素変性状態に比べると数倍近く大きいものが有った。グアニジン変性状態では完全にランダムではなくそれら残基の交換速度を遅くするような構造つまり、水分子が近づきにくいような構造を取っていると考えられた。

The research team is working hard to improve the quality of the products. The research on the stability of the system is carried out in the following ways: In particular, structural stability is discussed in thermodynamics, and it is necessary to understand natural structure and structural stability. Polarized dichroism is studied in different states, such as temperature, polarization, polarization, polarization In this study, we investigated the quantitative analysis of the chemical structure and chemical structure of the protein by NMR. In addition to the above, it is also possible to reduce the amount of water in the water. Second, the pH of the solution was adjusted to pH value. NMR determination of DMX600 in the main application. HD exchange rate measurement, a certain period of time 6M, the acid change After this, a large amount of heavy water was added to the solution, and the solution was separated from the solution. As a result, 6M acid is added to the medium at 10℃, and the HD exchange rate is increased. The exchange rate of NH is about 10 times higher than that of NH +4 in consideration of primary structure, pH, temperature and concentration of various chemicals. The residue numbers are 50, 60, 65 and 90. The temperature, temperature, and acidity of the solution vary by several times. Special CD selection is similar to the state of sleep, which is several times more than the state of sleep. The transition state is completely intact, so the exchange rate of residues is limited, and the structure of water molecules is close to each other.