リゾチームの塩酸グアニジン変性構造の解析

溶菌酶盐酸胍修饰结构分析

• 批准号: 07280206
• 负责人: 藤原 敏道
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Yokohama National University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07280206/
• 关键词: 変性構造; リゾチーム; 蛋白質安定性; 塩酸グアニジン; H-D交換

リゾチームについて円偏光二色性による研究から同じ変性状態でも温度変性とグアニジン変性では二次構造の存在が異なることが示唆されてる。一方、NMRによる研究より、熱変性状態の構造が完全なランダムコイルには至っていないことが示唆されている。そこで本研究ではNMRを用いて、卵白リゾチームの塩酸グアニジン変性と熱変性の比較を行った。実験としては、さまざまなpHおよび塩酸グアニジン濃度で、温度を変えて重水溶液中のニワトリ卵白リゾチームの^1H-NMRスペクトルの測定した。実験の結果、(1)pDの変化による変性温度はpD0.99から3.25まで変性温度が徐々に上昇していくが、それ以上のpDでは中性まで変性温度はほとんど変化しなかった。(2)0.5Mから3.0M塩酸グアニジン濃度までは、変性温度が徐々に下降して行くが、それ以上の塩酸ジアニジン濃度では6.0Mまで変性温度は10℃以下であった。(3)変性剤が存在する時も存在しない時も、変性した後、芳香環プロトン領域のスペクトルは温度とともに変化した。これはタンパク質の変性構造が温度に依存しているためであると考えられる。(4)pD2.5,3.0M以上の塩酸グアニジン存在下、10から30℃においては、変性状態でも交換しにくいアミドプロトンが存在した。これはCDから結論されているランダム構造と矛盾する。(5)pD2.5、6.0塩酸グアニジン存在下10℃において、NMRの信号強度の時間依存性から、アミドプロトンのHD交換速度を調べた。その半減期は5時間で20時間までは指数関数的に減少するが、それ以降はほとんど減少せず60時間後までもシグナルは残った。現在、これらアミドプロトンの信号同定し、変性構造の解析を行っている。

The study of polarization dichroism in different states, temperature variability, and the existence of secondary structures The structure of thermal state is completely different from that of NMR. This study compares the properties of NMR spectra with those of other spectra. The pH and pH of the solution were determined by 1H-NMR. The results are as follows: (1)pD is changed from pD0.99 to pD3.25, and pD is changed from pD0.99 to pD3.25. (2)0.5M ~ 3.0M acid concentration, temperature change, temperature decrease, acid concentration above 6.0M, temperature change below 10℃. (3)When the property exists, the property exists, the aromatic ring exists, and the temperature changes. The temperature dependence of the structure of the material is discussed. (4) When pD2.5, 3.0M or higher acid is present, 10 ℃ to 30℃, the temperature changes and the temperature changes. This is a contradiction in terms of structure. (5) In the presence of pD2.5, 6.0 and pD2.5, the time dependence of NMR signal intensity and HD exchange rate were modulated at 10℃. The half-time period is 5 minutes, the half-time period is 20 minutes, the half-time period is 60 minutes, the half-time period is 20 minutes, the half-time period is 60 minutes, the half-time period is 20 minutes, the half-time period is 60 minutes. Now, we can analyze the signal identity and the structure of the signal.