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リゾチームの塩酸グアニジン変性構造の解析

溶菌酶盐酸胍修饰结构分析

基本信息

批准号：
08272207
负责人：
藤原敏道
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Yokohama National University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

蛋白質の構築原理を理解するためには変性状態のタンパク質の構造を知り、天然構造との違いを物理化学的に明らかにする必要がある。よく研究されている卵白リゾチームについては、6M塩酸グアニジン存在下、pH2.5、10CではNMRから完全変性状態にあると考えられる。ところが、そのNMRスペクトルには半減期5時間以上のアミドプロトンが観測され、高次構造が存在していることを示唆した。そこで本研究では、この卵白リゾチームに関し、各アミノ酸残基についてHD交換速度を測定した。このために、リゾチームを塩酸グアニジンである時間変性させ、その後急激に希釈して天然状態に戻してから、分解能のよい2次元NOESYのNMRスペクトルを測定した。このスペクトルのH^αとNHのクロスピークの時間に依存した減衰をプロットし、これより交換速度を求めた。これから、α-ヘリックスやβ-シートなどの2次構造の部分、特にヘリックスCの部分が遅くプロテクション・ファクターは5から遅いもので100程度であった。60から65番目はループ部位に関わらず極めて交換速度の遅いNHが存在した。交換の遅い部分は、今まで尿素変性や温度変性で報告されている部分と一致しているが、塩酸グアニジン変性では10倍ほどプロテクション・ファクターが大きくなっている。塩酸グアニジン変性状態では、それら遅い残基NH近傍に水分子が接近できないようなコンパクトな構造を取っていると考えられる。

Protein construction principles are necessary for understanding the physical and chemical properties of proteins. In the presence of 6M hydrochloric acid, pH 2.5 and 10C, NMR was completely changed. For example, if the first half of the NMR spectrum is more than 5 times, the second half of the NMR spectrum is more than 5 times, and the third half of the NMR spectrum is more than 5 times. In this study, we determined the exchange rate of protein and amino acid residues. This is the second dimension of NOESY NMR. The time dependence of the change rate is determined by the change rate. The second order structure of α-, β- 60 65 The temperature variation of the mixture is reported to be 10 times higher than that of the mixture. The structure of the amino acid residue NH is close to the water molecule.