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原子レベルの分解能で見たリゾチームN状態の臨界構造安定性とアンフォールディング

原子分辨率下溶菌酶 N 态的临界结构稳定性和展开

基本信息

批准号：
09261239
负责人：
瀬川新一
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kwansei Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

蛋白質の立体構造の構築原理を理解するために、我々はパルス水素ラベル法と2次元NMR法を組み合わせて、蛋白質のアンフォールディング過程を各残基毎に観測する研究を行った。リ-ゾチーム分子を4.0M塩酸グアニジン(GuHCl)、pH3.0というU状態条件下におくと、10分程度の時間でアンフォールドする。この反応途中にあるリゾチームを10秒間軽水素でパルスラベルし、2次元NMRスペクトルから、約45残基に対し残基毎のアンフォールディング速度を観測した。それらは非常に近接しておりall-or-none型の構造変化が起きていることを明瞭に示している。しかし温度を10℃まで下げると、CDスペクトルの変化から観測された分子全体のアンフォールディング速度に比べ、水素パルスラベル法で観測されたものは5倍以上も速くプロテクションが解放されることが見出された。すなわち、アンフォールディング反応が著しく遅くなると、時間の経過とともに徐々に立体構造が溶融して、CDスペクトル的にはまだ十分N状態にあるにもかかわらず、水素パルスラベルに対するプロテクションが解けた構造に変化していることが明らかとなった。この結果はアンフォールディング反応の準備段階にある立体構造を実験的に検出したものとして重要な実験結果である。一方、パルスラベル反応から45個の残基毎のアンフォールディング反応の活性化エンタルピーを求めたが、これも分子全体に渡ってほぼ一様であった(βドメインのそれはαドメインのものに比べ、少し小さいことが僅かに認められる)。この活性化エンタルピーはCDスペクトルから観測された分子全体のアンフォールディングの活性化エンタルピーとほぼ等しい。以上、これらの実験結果はまだ論文発表されていないが、すでに97年度の蛋白質構造討論会で口頭発表されている。

To understand the principle of protein three-dimensional structure, we have conducted research on the composition of protein by two-dimensional NMR method and the determination of each residue. Under the condition of pH 3.0 and pH 3.0, the molecular weight of 4.0M acid (GuHCl) and pH 3.0, the time of 10 minutes. The reaction time was 10 seconds, and the 2D NMR spectra showed that there were about 45 residues in the reaction time. The structural transformation of all-or-none type is very close to each other. When the temperature is below 10℃, the temperature of the molecule is below 10℃. The temperature of the temperature of the molecule is below 10 ℃. The temperature of the temperature of the molecule is below 10 ℃. The temperature of the molecule is below 10 ℃. The temperature of the temperature of the temperature of The structure of the three-dimensional structure is melted and the structure of the three-dimensional structure is melted. The structure of the three-dimensional structure is melted and the structure of the three-dimensional structure is melted and the structure of the three-dimensional structure is melted. The result is that the preparation stage of three-dimensional structure is very important. The activity of each of the 45 residues in the molecule was determined by the following method: (1) The activity of each of the 45 residues in the molecule was determined by the activity of each of the residues in the molecule. The activation of the molecule is the result of the activation of the molecule. These results were presented orally at the 1997 Protein Structure Symposium.