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極微量組織由来cDNAライブラリーを用いたイネ受粉・受精時期特異的遺伝子の単離

使用微组织衍生的 cDNA 文库分离水稻授粉和受精时间特异性基因

基本信息

批准号：
09262212
负责人：
増村威宏
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

受粉・受精・胚発生時期について遺伝子発現制御機構の解明を目指し、人口光式植物育成装置内で、年間を通して受精・種子形成のプロセスが進行するイネの栽培条件を検討すると共に、花器官の極微量組織からイネの受粉・受精時期特異的なcDNAライブラリーの作製を試み、受粉・受精時期特異的に発現する遺伝子の単離を目的とした。イネ種子形成期の組織分化・器官形成の分子機構を明らかにする為に、これまでに登熟過程のイネ種子1/3粒由来の胚乳およびアリューロン層から微量組織特異的cDNAライブラリーを作製し、アリューロン層特異的に発現する遺伝子を効率良く単離した。本研究では、特定時期(開花後数時間など)の微量な組織を狙えば、効率良く目的の遺伝子を取得可能と考え、以下の実験計画を立てて研究を進めた。1)人口光式植物育成装置内で、年間を通じて常時、受精、種子形成のプロセスが進行するイネ(矮性イネ)を選抜し、栽培条件を確立した。2)イネ種子の重複受精、種子形成過程における細胞分化の状況を検討するため、胚乳細胞および胚芽におけるマーカータンパク質(貯蔵タンパク質、トリプシンインヒビターなど)に対する抗体を用い、共焦点レーザー走査蛍光顕微鏡による形態観察を行った。3)イネ種子開花直前、直後、2時間後、6時間後、12時間後等の各時期のイネ種子(子房部分)より、組織切片を作製し、レーザーメスを用いて、卵細胞や極核部分の切り出しを行った。4)受粉・受精時期特異的に発現する遺伝子を単離するために、イネ種子cDNAライブラリーをスクリーニング用プローブを微小組織由来mRNAからcDNAを合成することにより調製した。

The period of pollination, fertilization, and embryonic development is a plant that controls the mechanism of the period of pollination, fertilization, and embryo development. Fertilization and seed formation are carried out in the breeding device during the year, and the cultivation conditions are as follows:すると公に、Flower organ のvery minute tissue からイネのPollination and fertilization period-specific なcDNA ライThe ブラリーのproduced testみ, the pollination and fertilization period-specific に発成する缝子の単利をpurposeとした.イネSeed formation stageのMolecular mechanism of tissue differentiation and organ formationを明らかにする为に、これまでにAscension processのイネThe origin of 1/3 of the seedのEndospermおよびアリューロンlayerから Trace tissue-specific cDNA ライブラリーを productionし、アリューロンlayer-specific に発成する缝子をefficiencyく単利した. The purpose of this study is to determine the possibility of obtaining a small amount of tissue at a specific period (a few days after flowering), to achieve the goal of high efficiency, and to conduct research based on the following plans. 1) In the population light plant breeding device, fertilization and seed formation are carried out at regular intervals throughout the year, and cultivation conditions are established. 2) Repeated fertilization of seeds, seed formation process, cell differentiation status, endosperm cells, germ quality, etc. (トリプシンインヒビターなど)に対する antibody Use the confocal microscope to inspect the shape of the microscopic microscope. 3) The seeds (ovary part) of each flowering stage are directly before, directly after, 2 hours later, 6 hours later, 12 hours later, etc. Divide), tissue slices are made, tissue slices are made, slices are made, and egg cells are cut into polar nuclei. 4) Pollination and fertilization period-specific pollination and fertilization period-specific pollination and fertilization period-specific pollination and fertilization period-specific cDNA seeds The スクリーニング is synthesized using プローブをmicro-tissue-derived mRNA and cDNAをsynthetic することにより.