極微量組織由来cDNAライブラリーを用いたイネ受粉・受精時期特異的遺伝子の単離

使用微组织衍生的 cDNA 文库分离水稻授粉和受精时间特异性基因

• 批准号: 09262212
• 负责人: 増村 威宏
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09262212/
• 关键词: イネ; cDNAライブラリー; 受粉・受精; 種子形成; レーザーメス; 矮性イネ

受粉・受精・胚発生時期について遺伝子発現制御機構の解明を目指し、人口光式植物育成装置内で、年間を通して受精・種子形成のプロセスが進行するイネの栽培条件を検討すると共に、花器官の極微量組織からイネの受粉・受精時期特異的なcDNAライブラリーの作製を試み、受粉・受精時期特異的に発現する遺伝子の単離を目的とした。イネ種子形成期の組織分化・器官形成の分子機構を明らかにする為に、これまでに登熟過程のイネ種子1/3粒由来の胚乳およびアリューロン層から微量組織特異的cDNAライブラリーを作製し、アリューロン層特異的に発現する遺伝子を効率良く単離した。本研究では、特定時期(開花後数時間など)の微量な組織を狙えば、効率良く目的の遺伝子を取得可能と考え、以下の実験計画を立てて研究を進めた。1)人口光式植物育成装置内で、年間を通じて常時、受精、種子形成のプロセスが進行するイネ(矮性イネ)を選抜し、栽培条件を確立した。2)イネ種子の重複受精、種子形成過程における細胞分化の状況を検討するため、胚乳細胞および胚芽におけるマーカータンパク質(貯蔵タンパク質、トリプシンインヒビターなど)に対する抗体を用い、共焦点レーザー走査蛍光顕微鏡による形態観察を行った。3)イネ種子開花直前、直後、2時間後、6時間後、12時間後等の各時期のイネ種子(子房部分)より、組織切片を作製し、レーザーメスを用いて、卵細胞や極核部分の切り出しを行った。4)受粉・受精時期特異的に発現する遺伝子を単離するために、イネ種子cDNAライブラリーをスクリーニング用プローブを微小組織由来mRNAからcDNAを合成することにより調製した。

Pollination, fertilization, embryo 発 born period に つ い て posthumous son 伝 発 system now royal institution の interpret を refers し, population で within plant breeding apparatus, light years を tong し て fertilization, seed formation の プ ロ セ ス が for す る イ ネ の cultivation conditions を beg す 検 る と に, flower organ の minor tissue か ら イ ネ の pollination, fertilization period specific な cDNA ラ イ ブ ラ リ ー の Cropping を み, pollination, fertilization period specific に 発 now す る posthumous son 伝 の 単 from を purpose と し た. イ ネ seed formation の tissue differentiation, organ formation の molecular institutions を Ming ら か に す る に, こ れ ま で に's practice process の イ ネ お 1/3 origin の grain endosperm of seeds よ び ア リ ュ ー ロ ン layer か ら trace tissue specific cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を as し, ア リ ュ ー ロ ン layer specific に 発 now す る heritage 伝 son を sharper rate good く 単 from し た. This study で は, specific period (after flowering time な ど) trace な の organization を previously え ば, good working rate く purpose の heritage 伝 child obtain を may え と test, the following の be 験 project を made て を て research into め た. 1) population で within plant breeding apparatus, light years を tong じ て geomagnetic, fertilization and seed formation の プ ロ セ ス が for す る イ ネ (short イ ネ) を optional sorting し を, cultivation conditions established し た. 2) イ ネ の repeat fertilization and seed formation に お け る cell differentiation condition の を beg す 検 る た め, endosperm cell お よ び germ に お け る マ ー カ ー タ ン パ ク mass (storage 蔵 タ ン パ ク qualitative, ト リ プ シ ン イ ン ヒ ビ タ ー な ど) に す seaborne る antibody を い, total focus レ ー ザ ー walkthrough 蛍 light 顕 micromirror に よ る line form 観 examine を っ た. 3) イ ネ seed blossom ahead, straight after, 2, 6, 12 time after time after time etc. の period each の イ ネ seeds (ovary) よ り, biopsy を し, レ ー ザ ー メ ス を with い て, egg や polar nucleus part の り cutting out し を line っ た. 4) pollination, fertilization period specific に 発 now す る posthumous son 伝 を 単 from す る た め に, イ ネ seed cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を ス ク リ ー ニ ン グ with プ ロ ー ブ を tissue origin mRNA か ら cDNA を synthetic す る こ と に よ り modulation し た.

项目成果

Shiken Sha: "Structure of the rice glutaredoxin (thioltransferase) gene" Gene. 188. 23-28 (1997)

Shiken Sha：“水稻谷氧还蛋白（硫醇转移酶）基因的结构”基因。