MCM関連遺伝子sna41のDNA複製制御における機能解析

MCM相关基因sna41在DNA复制控制中的功能分析

• 批准号: 09263215
• 负责人: 三宅 早苗
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09263215/
• 关键词: MCM; DNA replication; nda4; sna41

DNA複製は細胞周期あたり1回に限定されるが、この制御系において、ライセンス因子やロ-ディング因子が核膜の形成と関連して重要な役割を果たしている。ライセンス因子の候補であるMCMファミリーに属する分裂酵母nda4変異株のサプレッサーsna41変異株を単離し、さらに、sna41遺伝子を単離した。本研究では、nda4産物の機能を明らかにするため、sna41産物が、DNA複製時において、MCM蛋白質および核膜とどの様に関わりながら機能するか、そのメカニズムを明らかとする事を目的とする。sna41産物はDNA複製に関与することが示されているので、DNA複製に欠損を示す変異株と二重変異株を作製した。sna41変異は、nda1と合成致死を示したが、同じMCM変異株でもcdc21やmis5と、あるいはORCのサブユニットであるORC1の変異cdc30とは合成致死も変異抑圧も示さなかった。このことから、sna41遺伝子は、nda4遺伝子のみならず、ndal遺伝子とも密接な関係があり、また、同じMCMに属するファミリーの中でも特にnda1とnda4遺伝子が関係が深いことが示された。次に、sna41産物の局在を調べるため、C末端にGFPをつけたsna41産物をコードする遺伝子を発現するプラスミドを作製し、分裂酵母菌株に導入し、発現を蛍光顕微鏡で調べた。このGFP-sna41融合蛋白質はsna41変異株の相補能はあったが、蛍光顕微鏡による発現は認められなかったことから、sna41産物は細胞内にごく微量しか存在しない可能性が示唆された。また、細胞分裂周期突然変異株cdc25を用いた同調培養を行い、細胞周期におけるsna41産物の変動をウエスタンブロット法により調べた。発現量は、細胞周期においてほぼ一定であり、機能発現において、蛋白質以外の制御系が働いていることが示唆された。

DNA replication は cell cycle あ た り 1 back に qualified さ れ る が, こ の suppression system に お い て, ラ イ セ ン ス factor や ロ - デ ィ ン グ factor が nuclear membrane の form と masato even し て important な "を cut fruit た し て い る. ラ イ セ ン ス factor の alternate で あ る MCM フ ァ ミ リ ー に genus す る split yeast nda4 - different strains の サ プ レ ッ サ ー sna41 - different strains を 単 し, さ ら に, sna41 but 伝 を 単 from し た. This study で は, の nda4 product functional を Ming ら か に す る た め, as the products of sna41 が, DNA replication に お い て, MCM protein お よ び nuclear membrane と ど の others に masato わ り な が ら function す る か, そ の メ カ ニ ズ ム を Ming ら か と す る matter を purpose と す る. Sna41 product は DNA replication に masato and す る こ と が shown さ れ て い る の で, DNA replication に owe loss を す - different strains と double - different strains を cropping し た. Sna41 - different は, nda1 と synthetic lethal を shown し た が, same じ MCM - different strains で も cdc21 や mis5 と, あ る い は ORC の サ ブ ユ ニ ッ ト で あ る ORC1 の - different cdc30 と は synthetic lethal も - different antimicrobial 圧 も shown さ な か っ た. こ の こ と か ら, sna41 heritage 伝 は, nda4 posthumous son 伝 の み な ら ず, ndal but 伝 と も contact な masato is が あ り, ま た, with じ MCM に す る フ ァ ミ リ ー の in で も, に nda1 と nda4 posthumous son 伝 が masato is が deep い こ と が shown さ れ た. Time に, product sna41 の bureau in を べ る た め, C terminal に GFP を つ け た sna41 product を コ ー ド す る heritage 伝 son を 発 now す る プ ラ ス ミ ド し, divided the を cropping yeast strains に import し, 発 を 蛍 light 顕 micromirror で adjustable べ た. こ の GFP - sna41 fusion protein は sna41 - different strains can fill は の phase あ っ た が 蛍 light 顕 micromirror に よ る 発 は now recognize め ら れ な か っ た こ と か ら, sna41 product は intracellular に ご く trace し か exist し な が い possibility in stopping さ れ た. ま た, cell division cycle suddenly - different strains cdc25 を with い た homology を line い, cell cycle に お け る sna41 product の - move を ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト method に よ り adjustable べ た. 発 now は, cell cycle に お い て ほ ぼ certain で あ り, function 発 now に お い て outside, protein の suppression system が 働 い て い る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

S.Miyake and S.Yamashita: "Identification of sna41 gene,which is the suppressor of nda4 mutation and is involved in DNA replication in Schizosaccharomyces pombe" Genes to Cells. (in press).

S.Miyake 和 S.Yamashita：“sna41 基因的鉴定，该基因是 nda4 突变的抑制因子，并参与粟酒裂殖酵母中的 DNA 复制”《基因到细胞》。