DNA複製制御における核膜の機能の解析

核膜控制DNA复制的功能分析

• 批准号: 07282218
• 负责人: 三宅 早苗
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07282218/
• 关键词: 核膜; DNA複製; MCM; nda; ライセンス因子

DNA複製において正の制御因子であるライセンス因子が想定され、MCMがその候補として考えられている。ライセンス因子によってDNA複製が細胞周期あたり1回に限定されるが、この制御系において、核膜がライセンス因子の通過を妨げるという重要な役割を果たしている。本研究では、MCMファミリーに属する分裂酵母nda1及びnda4産物、アフリカツメガエルxMCM2産物及びxCDC46産物の、DNA複製時における機能及び局在の変化を核膜と関連して明らかとする事を目的とした。nda4産物の機能を明らかにするため、nda4サプレッサー変異株を単離した。フローサイトメトリーの結果、サプレッサー変異株は制限温度下において1CのDNA含量の細胞が増加することから、DNA複製に関与することが示された。また、C末端にFLAGをつけたサプレッサー産物を分裂酵母細胞内で大量に発現し、FLAGに対する抗体を用いて蛍光抗体法を行った。同調していない細胞では、一部の細胞で核に局在が認められ、nda4産物と機能的に関連のあるサプレッサー産物は、核膜を通過する事が示された。また、アフリカツメガエルxMCM2産物及びxCDC46産物において、免疫沈降を行ったところ、どちらの抗体を用いても、もう一方の産物が共沈してくることから、両者は互いに結合していることが示された。また、精子核を鋳型としたアフリカツメガエル卵抽出液を用いたin vitro DNA複製系において、DNA複製にともなうこれらの遺伝子産物の局在の変化を調べた。xMCM2産物およびxCDC46産物は、DNA複製に先だち精子核に局在が認められたが、複製終了後、認められなくなった。これにより、この遺伝子産物は、DNA複製開始に関与すること、核膜形成以前にDNAと結合することが示唆された。

DNA replication に お い て is の suppression factor で あ る ラ イ セ ン ス factor が scenarios さ れ, MCM が そ の alternate と し て exam え ら れ て い る. ラ イ セ ン ス factor に よ っ て DNA replication が cell cycle あ た り 1 back に qualified さ れ る が, こ の suppression system に お い て, nuclear membrane が ラ イ セ ン ス factor の through を hinder げ る と い う important な "を cut fruit た し て い る. This study で は, MCM フ ァ ミ リ ー に genus す る split nda1 and yeast び nda4 product, ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル xMCM2 product and び xCDC46 product の, DNA replication に お け る function and び bureau in の variations change を nuclear membrane と masato even し て Ming ら か と す る matter を purpose と し た. The nda4 product has を function ら にするため にするため, and the nda4サプレッサ <s:1> variant is を単 た た. フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー の results, サ プ レ ッ サ ー variations under different strains は the limit temperature に お い て 1 c の が の cell DNA content rights and す る こ と か ら, DNA replication に masato and す る こ と が shown さ れ た. ま た, C terminal に FLAG を つ け た サ プ レ ッ サ を ー products division yeast cells で large に 発 し, FLAG に す seaborne を る antibody with い て 蛍 light line method of antibody を っ た. Homology し て い な い cells で は, a の cell nuclear に で bureau at が め ら れ, と nda4 product functional に masato even の あ る サ プ レ ッ サ は ー products, nuclear membrane を through す が る things in さ れ た. ま た, ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル xMCM2 product and び xCDC46 product に お い て, immune sink を line っ た と こ ろ, ど ち ら を の antibody with い て も, も う side の product が shen total し て く る こ と か ら, struck は mutual い に combining し て い る こ と が shown さ れ た. Type ま た, sperm nuclear を where と し た ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル eggs extract を with い た in vitro DNA replication system に お い て, DNA replication に と も な う こ れ ら の heritage 伝 zi chan content の bureau in の variations change を adjustable べ た. XMCM2 product お よ び xCDC46 product は, DNA replication に だ first ち sperm nuclear に bureau at が め ら れ た が, copy, after the end of め ら れ な く な っ た. こ れ に よ り, こ の heritage 伝 zi chan は, DNA replication began に masato and す る こ と に と combined with DNA, nuclear membrane formation before す る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Miyake S. et al: "Efficient generation of recombinant adenovirus using adonovirus DNA-terminal protein complex and a cosmid bearing the full-length virus genome." Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93. 1320-1324 (1996)

Miyake S. 等人：“使用腺病毒 DNA 末端蛋白复合物和带有全长病毒基因组的粘粒高效生成重组腺病毒。”

Tsukui T. et al: "Gene transfer and expression in mouse preimplantation embryos by recombinant adenovirus vector." Mol. Reprod. Dev.42. 291-297 (1995)

Tsukui T. 等人：“通过重组腺病毒载体在小鼠植入前胚胎中进行基因转移和表达。”

Makimura M. et al: "Induction of antibodies against structural proteins of hepatitis C virus in mice using recombinant adenovirus." Vaccine. 14. 28-34 (1996)

Makimura M. 等人：“使用重组腺病毒在小鼠体内诱导抗丙型肝炎病毒结构蛋白的抗体。”

Kimura K. et al: "Phosphatidylinositol-3 kinase in fission yeast: a possible role in stress responses" Biosci. Biotech. Biochem.59. 678-682 (1995)

Kimura K. 等人：“裂殖酵母中的磷脂酰肌醇 3 激酶：在应激反应中的可能作用”Biosci。

Miyake S. et al: "Identification of two Xenopus laevis genes, xMCM2 and xCDC46,with sequence homology to MCM genes involved in DNA replication" Gene. (in press).

Miyake S. 等人：“鉴定了两个非洲爪蟾基因 xMCM2 和 xCDC46，与参与 DNA 复制的 MCM 基因具有序列同源性”基因。