神経系におけるゲノム機能解析のためのツール開発と行動遺伝学への応用
神经系统基因组功能分析工具的开发及其在行为遗传学中的应用
基本信息
- 批准号:14011208
- 负责人:
- 金额:$ 3.71万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:2002
- 资助国家:日本
- 起止时间:2002 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
線虫は全細胞が同定されているなど、高い分解能の解析が行えるが、体長が約1mmと小さいことから特定の組織/細胞を切り出すことができない。特定の細胞群からのみのmRNAを得ることを可能とするための方法の開発を試みた。細胞のすべてのmRNAのポリAテールに結合する性質のあるpolyA結合蛋白質(PABP)にFLAG-His-GFPタグを付けたコンストラクトを作成した。これを特異的プロモーターで発現させ、in vivoの状態でmRNAとクロスリンクした後に、すり潰して抽出液からタグを手がかりに蛋白質-RNA複合体を回収し、クロスリンクを解除した後に、RNAを回収する。このRNAからcDNAを合成する。パイロット実験として全身でタグ付きPABPを安定に発現する株を作成し上記の分離操作を施したところ、クロスリンクした時にのみmRNAが回収され、この方法が期待通りに働くことが確認された。そこで、感覚神経、運動神経、筋肉のそれぞれにタグ付きPABPを発現させ、それぞれから同じ方法でmRNAの回収を行った。多くの場合、それぞれのサンプルにおいてそれぞれの組織に特異的な遺伝子の濃縮が見られた。得られた感覚神経と運動神経のRNAサンプルをプローブとして用い、国立遺伝研、小原教授のグループにより、cDNAマイクロアレイへのハイブリダイゼーションを行った。感覚神経RNAサンプル/運動神経RNAサンプルのシグナル比の高いもの9クローンについて、GFPレポーター遺伝子を作成し、発現を調べた。この結果、うち8クローンは期待されたとおり感覚神経に発現していることが確認された。この方法は特定の細胞群に特異的に発現する遺伝子の網羅的な同定、特定の細胞群だけの外界刺激や突然変異による遺伝子発現の変化の検出などに有用であると考えられる。
The whole cell of the worm is constant, and the high decomposition energy is analyzed. The length is about 1mm, and the specific tissue/cell is cut out. The development of a method for obtaining mRNA from specific cell populations The expression of FLAG-His-GFP was determined by the binding properties of the mRNA. The protein RNA complex was detected in the specific protein expression, mRNA expression in vivo, RNA expression in the extract, and RNA expression in vivo. RNA and cDNA are synthesized. The method of preparing the isolated plant from the whole body of PABP is expected to be successful. The expression of PABP and mRNA in the brain, muscle, and muscle was studied. In many cases, the concentration of the specific protein in the tissue can be seen. The RNA of the brain and the brain are very important to the development of the brain. Sensory/motor RNA profiles are highly regulated by the production and expression of GFP profiles. The result of this is that we are looking forward to seeing you again. The method is useful for identifying the identity of the gene pool for specific cell populations, for detecting changes in gene pool for specific cell populations, and for detecting changes in gene pool for sudden changes in external stimuli.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
T.Ishihara, Y.Iino, A.Mohri, I.Mori, K.Gengyo-Ando, S.Mitani, I.Katsura: "HEN-1, a secretory protein with an LDL receptor motif, regulates sensory integration and learning in Caenorhabditis elegans"Cell. 109. 639-649 (2002)
T.Ishihara、Y.Iino、A.Mohri、I.Mori、K.Gengyo-Ando、S.Mitani、I.Katsura:“HEN-1 是一种具有 LDL 受体基序的分泌蛋白,调节感觉统合和学习
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Amemiya S
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- 发表时间:
2019 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
豊島 有;佐藤 研;三上 秀治;Stephen Wu; 佐藤 博文;Jang Moon-Sun;金森 真奈美;滝沢 拓己;大江 紗;寺本 孝行;徳永 旭将;広瀬 修; 合田 圭介;石原 健;吉田亮;飯野 雄一 - 通讯作者:
飯野 雄一
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飯野 雄一
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- 发表时间:
2017 - 期刊:
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- 作者:
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石原 健
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