哺乳類培養細胞系を用いた高速機能解析技術の開発と応用

利用培养哺乳动物细胞系统的高速功能分析技术的开发和应用

• 批准号: 14011233
• 负责人: 加藤 菊也
• 金额: $ 3.9万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14011233/
• 关键词: reverse transfection; atelocollagen; 遺伝子発現プロファイル; 定量PCR

マウス小脳の生後発達過程及びラット培養細胞PC12を用いたトリプレットリピートに関する研究において、ATAC-PCRによる高精度な遺伝子発現プロファイル解析を行うと同時に、培養細胞系での大規模な遺伝子機能解析のための技術開発を行っている。今年度は細胞内へのDNA導入法としてreverse transfection法及びatelocollagenを用いたtransfection法について検討し、実験法を確立した。reverse transfection法は、1枚のスライドガラス上で数千の遺伝子を発現する細胞を観察することができる。Green FuluoroProteinを発現ベクターに組み込んでreverse transfectionを行った結果では、3種類のplasmidベクターでそれぞれ良好な結果が得られた。また、atelocollagenはplasmid DNAのみでなくアデノウイルスベクターやsiRNAを安定して細胞内に導入できるバイオマテリアルとして注目されており、遺伝子導入後にそれぞれの細胞の形態変化をArrayScan II (Cellomics社)により自動的に検出・解析するシステムが確立されている。これらの方法により、一回の実験で数百の遺伝子を発現する細胞を観察し、薬剤処理など培養条件を変化させて多数の遺伝子の機能を調べることが可能になった。現在、分化の程度の異なる小脳顆粒細胞間で発現の変化する307個の遺伝子の全長ORFをクローニングし、PC12細胞を用いて機能解析を行っている。今後、解析に用いる遺伝子のクローニングを進め、mRNAおよびタンパク質の2つの面から大規模な解析を行うことによって、これまで解析の難しかった哺乳類における発現プロファイル研究に新たな進展がみられると期待される。

In order to achieve the process and training process after birth, PC12 has been able to analyze the performance of large-scale computer simultaneity and large-scale computer simultaneously. the computer can analyze the performance of large-scale computer simultaneously. it can be used to analyze the performance of large-scale model machines. This year, the intracellular DNA method was introduced into the reverse transfection method and the atelocollagen method was established using the transfection method and the transfection method. In the reverse transfection method, there are several thousands of children in the reverse transfection method, and the cells are detected. Green FuluoroProtein failed to improve the performance of the reverse transfection. The results showed that the results were good, and the results of the three categories of plasmid were good. After the introduction of the atelocollagen and plasmid DNA devices, the cell configuration of the ArrayScan II (Cellomics news agency) was analyzed, and the automatic data analysis of the ArrayScan II (Cellomics news agency) was established. In this way, you can use hundreds of thousands of people at a time to find out that the cells are monitored, and the conditions are improved. Most of the sub-machines are able to make sure that they are not available. At present, the degree of differentiation is different from each other. The whole length of 307 ORF cells can be analyzed by computer, and PC12 cells can be analyzed by computer. In the future, we will be able to analyze the impact of large-scale disease models on the basis of the rapid development of mRNA. In the future, we will be able to analyze the impact of large-scale models. in the future, we will analyze the rapid development of large-scale models. in the future, we will be able to analyze the impact of large-scale models. in the future, we will analyze the development of health care in mammalia. in the future, we will be able to make progress in the study of health problems in mammals.

项目成果

Hiroko Kita: "Modulation of polyglutamine-induced cell death by genes identified by expression profiling"Human Molecular Genetics. 11. 2279-2287 (2002)

Hiroko Kita：“通过表达谱鉴定的基因调节多聚谷氨酰胺诱导的细胞死亡”人类分子遗传学。