ショウジョウバエ味覚器形成と機能分化に関する網羅的遺伝子解析

果蝇味觉器官形成和功能分化的综合遗传分析

• 批准号: 14011251
• 负责人: 中村 真
• 金额: $ 3.01万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14011251/
• 关键词: ゲノム; シグナル伝達; 生理; 脳; 神経; 味覚; 発生・分化

これまでに約5,000系統の新規P因子挿入個体の解析を終了した。当初目標は1万系統であったが、我々のグループの規模から考えると5,000という数には満足している。5,000系統中、約1割の個体が、翅もしくは脚の感覚神経組織にレポーターの発現を示した。これらの中から、非神経組織での強い発現のある個体を除去し、約250系統を2次スクリーニングに回した。2次スクリーニングではコンフォーカル顕微鏡を用いてさらに細胞レベルでのスクリーニングを行い、味覚神経細胞中何個の神経細胞(または補助細胞)での発現がみられるかを検討した。その結果、味覚神経クラスター中で、1個の神経細胞でのみ発現が見られるもの(12系統)、2個の神経細胞(9系統)、3個の神経細胞(12系統)、4-5個の神経細胞(57系統)、付属細胞で発現(27系統)、付属細胞と神経細胞で発現(12系統)がそれぞれ得られた。P因子の挿入箇所は167系統に関してInverse-PCRによって検討した。その結果、129系統(77%)に関して挿入部位が判明した。ここまでの段階での最大の収穫は、5個の神経細胞クラスター中の1個、もしくは2個といった少数の神経細胞でレポーターを発現する系統が多数(合計21系統)単離されたことである。これらの系統のP因子挿入箇所はすべて判明している。この中で9系統に関してはゲノムデータベース解析によりトラップしていると思われる遺伝子が明らかになっている。残りの12系統に関しては、挿入位置近傍のゲノム配列からは、トラップ遺伝子の候補は判明していない。これらに関しては、個々の遺伝子座ごとにさらに詳しい解析が必要である。

迄今为止，我们已经完成了大约5,000个新颖的P因子插入物的分析。最初，我们的目标是10,000个系统，但是考虑到我们小组的规模，我们对5,000个数字感到满意。在5,000个菌株中，大约10％的个体在翅膀或腿部的感觉神经组织中表现出报告基因的表达。其中，除去非神经组织中强烈表达的个体被去除，并将大约250个菌株发送用于次级筛查。在次要筛选中，使用共聚焦显微镜在细胞水平上进行进一步的筛查，以确定在味觉神经元中表达多少神经元（或辅助细胞）。结果，仅在一个神经元（12行），2个神经元（9行），3个神经元（12行），4-5个神经元（57行）中观察到表达，并在附着的细胞（27行）中表达，并在附着的细胞和神经元（12条线）中表达。通过逆PCR检查因子P的插入位点的167个菌株。发现插入位点的129菌株（77％）。在这个阶段，最大的收获是在少数神经元中表达记者的许多线（总计21行），五个神经元中的一两个。这些菌株中的所有P因子插入位点均已知道。其中，基因组数据库分析揭示了9种菌株，以揭示似乎被困的基因。对于其余12个菌株，从插入位置附近的基因组序列中没有发现候选陷阱基因。这些需要为每个单独的基因座进行进一步的详细分析。

项目成果

Makoto Nakamura: "DPR, a member of the immunoglobulin superfamily required for the gustatory response to salt"Journal of Neuroscience. 22(9). 3463-6472 (2002)

Makoto Nakamura：“DPR，对盐的味觉反应所需的免疫球蛋白超家族的成员”《神经科学杂志》。