ショウジョウバエ末梢神経発生におけるRNA結合タンパクmusashiの役割

RNA结合蛋白musashi在果蝇周围神经发育中的作用

• 批准号: 07780644
• 负责人: 中村 真
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780644/
• 关键词: ショウジョウバエ; RNA-結合タンパク質; 末梢神経系; 神経分化; 遺伝学的スクリーニング

musashiと遺伝学的に強い相互作用をするmutantのスクリーニングを行ったが、transhetero zygoteで強くinteractする系統は得られなかった。そこで、msi遺伝子の強制発現で、msiの獲得表現型を示す個体を作成するために、msi cDNAをheat shock promoterを用いて発現するトランスジェニック個体作った。この個体の発生時期の様々な段階でheat shockを与えたところ、成虫のwing形成に異常をきたす個体が多数見られた。今後、羽以外にもphenotypeを発現するのか、また羽の表現型が他のmutationによって影響されるのか調べる予定である。polyclonal抗体作成のため、GST-fusionタンパクをバクテリアの大量発現系を用いて作成し、アクリルアミドゲルで部分精製しラットに免疫した。その結果、GST-fusionに対して、Western blotで強く反応する血清を得た。現在affinity purificationを行っているが、予備的な結果としてembryoの末梢神経系を特異的に染めることが分かった。今後はこの抗体を用いて、末梢神経細胞分化のどの時期にMSIが働いているのかさらに検討する予定である。

我们筛选了与Musashi具有较强遗传相互作用的突变体，但没有获得与thanshetero zygote强烈相互作用的菌株。因此，为了创建通过强行表达MSI基因表现出MSI采集表型的个体，我们创建了一个使用热激启动子表达MSI cDNA的转基因个体。当在这个人的发展的各个阶段给予热休克时，发现许多人在成年人的翅膀形成时具有异常。将来，我们将研究它是否表达羽毛以外的其他表型，以及羽毛表型是否受其他突变的影响。为了制备多克隆抗体，使用细菌的大规模表达系统制备了GST融合蛋白，在丙烯酰胺凝胶上部分纯化和免疫大鼠。结果，获得了对用蛋白质印迹的GST融合强烈反应的血清。当前，进行亲和力纯化，并发现初步结果特异性染色了胚胎的周围神经系统。将来，我们将使用该抗体在周围神经元分化的什么时候进一步研究。

项目成果

中村真: "ヘッジホッグと形態形成-保存された細胞間シグナルの担い手" 実験医学. 13. 17-19 (1995)

Makoto Nakamura：“刺猬和形态发生 - 保守细胞间信号的载体”实验医学。 13. 17-19 (1995)

中村真: "musashiと末梢神経分化" 生物物理. 35. 223-225 (1995)

Makoto Nakamura：“武藏和周围神经分化”生物物理学 35. 223-225 (1995)。