感染病態形成におけるフリーラジカル病因論に関する研究

传染病发病机制中自由基发病机制的研究

• 批准号: 14021096
• 负责人: 赤池 孝章
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021096/
• 关键词: ウイルス感染病態; フリーラジカル病因論; NO; 8-ニトログアノシン; パーオキシナイトライト; 活性酸化窒素; 塩基損傷; 遺伝子変異

本年度の研究においては、特に、NOによる生体内での核酸ニトロ化反応に焦点をあて、ウイルス感染病態の解析を行った。具体的には、核酸塩基グアニンのパーオキシナイトライトなどの活性酸化窒素種によるニトロ化産物である8-ニトログアノシンの抗体を作製し、インフルエンザウイルス感染モデルにおける8-ニトログアノシン生成を検討した(Akaike et al.,PNAS,100:685-690,2003)。さらに、8-ニトログアノシンの生体内生成を介する毒性発現のメカニズムをその酸素ラジカル産生能に注目して解析を行った。研究成果は以下の通りである。(1)8-ニトログアノシンの大量有概合成法を確立し、抗体作成および8-ニトログアノシンの感染病態における生体内生成とその生物効果の解析に供した。常法により、8-ニトログアノシン特異的ウサギポリクローナルおよびマウスモノクローナル抗体を作成した。(2)本抗体を用いて、マウスインフルエンザウイルス肺炎モデルにおける8-ニトログアノシンの生体内生成を免疫組織化学的に解析した。その結果、インフルエンザウイルス感染マウスの肺組織において、誘導型NO合成酵素(iNOS)の発現に伴って、気管支・細気管支上皮細胞と一部の滲出マクロファージに濃染像が認められた。一方、正常マウスおよびiNOS欠損マウス肺では、染色像は確認出来なかった。また、抗8-ニトログアノシンのモノクローナル抗体を用いた免疫細胞化学染色により、サイトカイン刺激によりiNOSを発現したRAW 264細胞(マウスマクロファージ様細胞株)や、iNOS遺伝子を強制発現させたCOS-1細胞においても、著明な8-ニトログアノシン生成が確認された。これらの知見より、ウイルス感染病態における8-ニトログアノシンの生体内生成が明らかになった。(3)NO生成を介して産生される8-ニトログアノシンは、強力な化学的反応性(レドックス活性)を有していることも分かってきた。すなわち、8-ニトログアノシンは、生体内に豊富に存在するNADPH依存性還元酵素、例えば、P450 reductaseやiNOSを含めたすべてのNOSアイソフォーム(血管型eNOS,神経型nNOS)により-電子還元されることにより活性化され、8-ニトログアノシンラジカルに変換し、さらに、溶存酸素を-電子還元し著明なスーパーオキサイド産生をもたらすことが明らかになった。このことは、8-ニトログアノシンが感染病態における酸化ストレスのメディエーターであることを示唆している。

This year's research focuses on nucleic acid reaction in vivo, special research, and NO analysis of infection pathologies. Specifically, nucleic acid residuesどのActivated acidifying sulfide species によるニトロ chemical product である8-ニトログアNose Antibodies Manufacturing Co., Ltd. Akaike et al., PNAS, 100:685-690, 2003).さらに, 8-ニトログアノシンの is produced in vivo and is toxic and toxic. The メカニズムをその acid element ラジカルproduces the ability to pay attention to the して analysis を行った. The research results are as follows. (1) A large-scale synthesis method for 8-Natural 8-ニトログアノシンの has been established, and antibody production has been completedトログアノシンのInfection morbidity における生 in vivo generation とそのbiological effect のANALYSIS にsupply した. Regular method, 8-ニトログアノシンSpecial ウサギポリクしたしたした(2) This antibody is suitable for use with いて, マウスインフルエンザウイルス pneumonia モデルにおAnalysis of the immunohistochemistry of ける8-ニトログアノシンの in vivo.そのRESULTS, インフルエンザウイルス infection of マウスの lung tissue において, inducible NO synthase (iNOS ), the appearance of the epithelial cells of the duct branch and the fine duct branch of the epithelial cell is exuded, and the thick staining image is seen. On the one hand, the normal malocclusion of the iNOS defective maize lungs, and the staining image was confirmed by the disease.また, anti-8-ニトログアノシンのモノクローナル antibody, いた immune cells Cytochemistry staining, Stainless stimulation, iNOS, RAW 264 cells (Mascan cell line) and iNOS legacy cells are now in force.せたCOS-1 cell においても, な8-ニトログアノシン generation and confirmation された.これらの知见より, ウイルス infection sick における8-ニトログアノシンの生 が明らかになった. (3) NO-generated を-suke して-produced される8-ニトログアノシンは, strong なChemical reactivity (reactivity) is determined by the chemical reaction.すなわち, 8-ニトログアノシンは, に豊富にexisting in vivo NADPH-dependent reducing enzyme, example えば, P450 reductase やiNOSをcontaining めたすべてのNOSアイソフォーム(vascular type eNOS, divine type nNOS) により-electron reduction されることにより activity Chemical され, 8-ニトログアノシンラジカルに変changeし, さらに, dissolved acid element を-电The child returns to the original し出明なスーパーオキサイドproduces the をもたらすことが明らかになった.このことは, 8-ニトログアノシンが infection sick における acid化ストレスのメディエーターであることをshows instigation している.

项目成果

Alam, M.S.et al.: "Host defense role of nitric oxide in murine salmonellosis as a function of its antibacterial and antiapoptotic activities"Infect. Immun.. 70. 3130-3142 (2002)

Alam，M.S.等人：“一氧化氮在鼠沙门氏菌病中的宿主防御作用作为其抗菌和抗凋亡活性的功能”感染。

赤池孝章: "感染症の病態を操る分子: NO-感染症におけるNOの役割"医学のあゆみ. 204(9). 702-706 (2003)

Takaaki Akaike：“控制传染病病理的分子：NO 在传染病中的作用”医学史 204(9) 702-706 (2003)。

Tanaka, S. et al.: "Antiapoptotic effect of haem oxygenase-1 induced by nitric oxide in experimental solid tumour"Br. J. Cancer. (in press). (2003)

Tanaka, S. 等人：“实验性实体瘤中一氧化氮诱导的血红素加氧酶-1 的抗凋亡作用”Br。

Okamoto, T. et al.: "S-Nitrosothiols inhibit cytokine-mediated induction of MMP-9 in airway epithelial cells"Am. J. Respir. Cell Mol. Biol.. 27. 463-473 (2002)

Okamoto, T. 等人：“S-亚硝基硫醇抑制气道上皮细胞中细胞因子介导的 MMP-9 诱导”Am。

Wu, J.et al.: "Identification of bradykinin receptors in clinical cancer specimens and murine tumor tissues"International J. Cancer. 98. 29-35 (2002)

Wu，J.等人：“临床癌症标本和小鼠肿瘤组织中缓激肽受体的鉴定”International J. Cancer。