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銅トランスポータATP7A・ATP7Bによる抗癌剤耐性の分子機構の解析

铜转运蛋白ATP7A和ATP7B抗癌耐药的分子机制分析

基本信息

批准号：
14030072
负责人：
古川龍彦
金额：
$ 3.9万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030072/
关键词：
銅トランスポータ抗癌剤耐性シスプラチン PタイプATPase

项目摘要

複数のATP7A発現細胞を用いて、種々の抗癌剤に対する耐性度をMTTアッセイで調べた。アドリアマイシン(ADM)、Mitxantrone、CPT-11、VP-16、Paclitaxel、CDDP、SN-38に対してそれぞれ10、5.5、3.5、10、2.5、100倍の耐性を示すことが確認できた。抗癌剤ADMに対してATP7A発現細胞は約10倍耐性となる。その蛍光を利用して、ADMのATP7A発現細胞での細胞内の局在を調べた。その結果、親株細胞やATP7B発現細胞では核に強い蛍光が観察されたが、ATP7A発現細胞ではADMの蛍光が全体に弱く、蛍光も核周辺に局在していることが確認された。さらに、RI標識ADMを用いてその細胞外への排出を調べたATP7A発現細胞でADMの排出が亢進して蓄積が減少していた。ヒンジドメインの1270番目のアスパラギンをセリンに置換した変異型ATP7B(激症型ウイルソン病の患者に見られる)の発現細胞と6つある銅結合部位の5種類の欠失変異ATP7B発現細胞を単離して、CDDPに対する耐性を調べた。銅の輸送に重要であると考えられるヒンジドメインの変異体や6番目の銅結合部位の欠失変異体ではCDDPに対して感受性を示し、ATP7Bの輸送機能がCDDP耐性に関わっている可能性をしめした。また、野生型のATP7B発現細胞について様々な発現量を示す10個以上におよぶATP7B発現細胞株と単離してCDDP耐性を検討した。その結果ATP7Bの発現量が非常に高い場株ではCDDPにむしろ感受性になる結果を得た。ATP7AとATP7B発現細胞の耐性克服薬剤のスクリーニングを行っているが、現在までのところ、有望な薬剤は見いだしていない。

A plurality of ATP7A-producing cells are used to modulate MTT resistance to anticancer agents. For ADM, Mitxantrone, CPT-11, VP-16, Paclitaxel, CDDP, SN-38, the resistance is 10, 5.5, 3.5, 10, 2.5, 100 fold. ATP7A-producing cells are about 10-fold more resistant to ADM than to cancer. The ATP7A gene of ADM is used to regulate the intracellular structure of ADM cells. As a result, the parent cells and ATP7B producing cells were detected by intense light in the nucleus, and ATP7A producing cells were detected by intense light in the nucleus. In addition, the expression of ATP7A in ADM cells is regulated by the expression of RI, and the expression of ADM in ADM cells is increased. The 1270-segment loss of ATP7B in the 1270-segment segment of the disease was replaced by different ATP7B (seen in patients with excitatory disease). The 6-segment copper binding site of the 5-segment loss of ATP7B in the 1270-segment of the disease was isolated and CDDP tolerance was modulated. The transport of copper is important, and the transport function of ATP7B is related to the possibility of CDDP resistance. In addition, more than 10 wild-type ATP7B-producing cells were shown to produce more than 10 ATP, and few ATP7B-producing cell lines were tested for CDDP tolerance. The results show that ATP 7B is very high in the field and CDDP is very sensitive. ATP7A and ATP7B show tolerance in cells.