銅トランスポータATP7A・ATP7Bによる抗癌剤耐性の分子機構の解析

铜转运蛋白ATP7A和ATP7B抗癌耐药的分子机制分析

基本信息

批准号：
14030072
负责人：
古川龍彦
金额：
$ 3.9万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030072/
关键词：
銅トランスポータ抗癌剤耐性シスプラチン PタイプATPase

项目摘要

複数のATP7A発現細胞を用いて、種々の抗癌剤に対する耐性度をMTTアッセイで調べた。アドリアマイシン(ADM)、Mitxantrone、CPT-11、VP-16、Paclitaxel、CDDP、SN-38に対してそれぞれ10、5.5、3.5、10、2.5、100倍の耐性を示すことが確認できた。抗癌剤ADMに対してATP7A発現細胞は約10倍耐性となる。その蛍光を利用して、ADMのATP7A発現細胞での細胞内の局在を調べた。その結果、親株細胞やATP7B発現細胞では核に強い蛍光が観察されたが、ATP7A発現細胞ではADMの蛍光が全体に弱く、蛍光も核周辺に局在していることが確認された。さらに、RI標識ADMを用いてその細胞外への排出を調べたATP7A発現細胞でADMの排出が亢進して蓄積が減少していた。ヒンジドメインの1270番目のアスパラギンをセリンに置換した変異型ATP7B(激症型ウイルソン病の患者に見られる)の発現細胞と6つある銅結合部位の5種類の欠失変異ATP7B発現細胞を単離して、CDDPに対する耐性を調べた。銅の輸送に重要であると考えられるヒンジドメインの変異体や6番目の銅結合部位の欠失変異体ではCDDPに対して感受性を示し、ATP7Bの輸送機能がCDDP耐性に関わっている可能性をしめした。また、野生型のATP7B発現細胞について様々な発現量を示す10個以上におよぶATP7B発現細胞株と単離してCDDP耐性を検討した。その結果ATP7Bの発現量が非常に高い場株ではCDDPにむしろ感受性になる結果を得た。ATP7AとATP7B発現細胞の耐性克服薬剤のスクリーニングを行っているが、現在までのところ、有望な薬剤は見いだしていない。

通过MTT测定，多种ATP7A表达细胞用于确定对各种抗癌药物的抗性。已经证实，分别表现出10、5.5、3.5、10、2.5和100倍对adriamycin（ADM），Mitxantrone，CPT-11，VP-16，Paclitaxel，CDDP和SN-38的耐药性。表达ATP7A的细胞对抗癌药物ADM的抗性约10倍。荧光用于研究ADM在表达ATP7A的细胞中的细胞内定位。结果，在父母细胞和表达ATP7B的细胞中观察到了强荧光，但可以证实，在表达ATP7A的细胞中，ADM荧光较弱，并且该荧光也位于细胞核周围。此外，在表达ATP7A的细胞中增加了ADM排泄，并减少了积累，并使用RI标记的ADM检查了对细胞外细胞的排泄。表达突变体ATP7B的细胞（在严重的威尔逊氏病患者中发现）在1270th铰链结构域中用天冬酰胺替换为丝氨酸，五个缺失突变体ATP7b用六个具有六个铜结合位点的表达细胞表达细胞以检查对CDDP的耐药性。一个铰链域突变体对铜的传输很重要，在第六铜结合位点处的缺失突变体对CDDP表示敏感性，这表明ATP7B的转运功能可能与CDDP抗性有关。此外，通过用具有不同表达水平的10个或更多表达ATP7B的细胞系分离野生型ATP7B的细胞来检查CDDP耐药性。结果，我们发现在具有非常高的ATP7B表达水平的野外应变中，它对CDDP变得更加敏感。尽管已经进行了克服ATP7A和ATP7B表达细胞中耐药性的药物的筛选，但迄今为止尚未发现有希望的药物。