ゴルジ体の構造がタンパク質の成熟の・輸送・品質管理に果たす役割の解析

高尔基体结构在蛋白质成熟、运输和质量控制中的作用分析

• 批准号: 14037221
• 负责人: 中村 暢宏
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14037221/
• 关键词: ゴルジ体; 小胞輸送; 局在化; 膜タンパク質

低pH処理などの細胞へのストレスが、ゴルジ体の分散を引き起こす分子メカニズムを明らかにするとともに、ゴルジ体の構造がタンパク質の成熟・輸送・品質管理にどのような役割を果たしているのかを解析する事を目的として実験を行った。(1)高張と低張処理でのゴルジ体の変化を形態学的に解析したところ、ゴルジ体の分散が観察されたが、低pH処理程の効果は見られなかった。そこで、細胞外液の組成を詳しく検討したところ、カリウムイオンの濃度が低いとゴルジ体の分散が見られる事が明らかとなった。カルシウムイオンやマグネシウムイオンによる効果は顕著ではなかった。現在、低pH処理や低カリウム処理によってゴルジ体が分散する原因をさらに検討中である。(2)GRASP65のリン酸化が細胞のストレス時に上昇する可能性が明らかになっているので、このGRASP65のリン酸化とゴルジ体構造変化の因果関係の解析を行った。GRASP65のリン酸化部位の解析を行ったところ、284番目のセリン残基(Ser284)が顕著にリン酸化されることを見いだした。Ser284は、血清やEGF刺激によってリン酸化が上昇する事が明らかとなった。また、細胞分裂期にも顕著なリン酸化の上昇を示す事が明らかとなった。現在、培養細胞を用いたアッセイ系及び、in vitroのゴルジ体再構成系を構築し、Ser284のリン酸化の機能の解析を行っている。(3)GTP結合変異型Sarlpを培養細胞に発現させると小胞体からゴルジ体への輸送が阻害される。この条件下でのゴルジ体の形態変化の解析を行った。変異型Sarlp発現後4時間でゴルジ体の多くのタンパク質が小胞体へ逆行輸送されるが、シスゴルジ層板の多くのタンパク質が小胞体へは輸送されず、細胞質の独立した膜構造体に残る事が明らかとなった。この結果は論文にまとめ現在投稿中である。

Low pH 処 Richard な ど の cells へ の ス ト レ ス が, ゴ ル の dispersed を lead き ジ bodies こ す molecular メ カ ニ ズ ム を Ming ら か に す る と と も に, ゴ ル の ジ body structure が タ ン パ ク の mature quality, delivery, quality management に ど の よ う な "を cut fruit た し て い る の か を parsing す る matter を purpose と し て be 験 を line っ た. (1) high と low card 処 Richard で の ゴ ル ジ body の - を morphology of analytical し に た と こ ろ, ゴ ル ジ body の scattered が 観 examine さ れ た が, low pH 処 cheng の unseen fruit は see ら れ な か っ た. そ こ で, extracellular fluid of の を detailed し く beg し 検 た と こ ろ, カ リ ウ ム イ オ ン の low concentration が い と ゴ ル ジ body see scattered の が ら れ る matter が Ming ら か と な っ た. カ ル シ ウ ム イ オ ン や マ グ ネ シ ウ ム イ オ ン に よ る unseen fruit は 顕 the で は な か っ た. Now, low pH treatment や low カリウム treatment によってゴ ジ ジ body が dispersion する cause をさらに検 discussion である (2) GRASP65 の リ ン acidification が cells の ス ト レ ス に rose す る possibility が Ming ら か に な っ て い る の で, こ の GRASP65 の リ ン acidification と ゴ ル ジ structure variations of the causal masato の の parsing line を っ た. GRASP65 の リ ン acidification parts line analytical を の っ た と こ ろ, 284's mesh の セ リ ン residues (Ser284) が 顕 the に リ ン acidification さ れ る こ と を see い だ し た. Ser284 ら and serum やEGF stimulate によってリ <s:1> acidification が increase する phenomena が, ら する となった. ま た, cell division period に も 顕 the な リ ン acidification の rise を が す things in Ming ら か と な っ た. Now, cultivating cells を using い た ア ッ セ イ and び, in vitro の ゴ ル ジ body to constitute を build し, Ser284 の リ ン acidification の line function analytical を の っ て い る. (3)GTP combined with variant Sarlpを cultured cells に exhibit させると small cell bodies らゴ らゴ ジ ジ bodies へ <s:1> transport が inhibition される. Under the <s:1> <s:1> condition, で <s:1> ゴ ゴ ジ ジ body <s:1> morphological transformation <e:1> analysis を lines った. - alien Sarlp 発 now after 4 time で ゴ ル ジ body の more く の タ ン パ ク qualitative が small cell body へ retrograde transport さ れ る が, シ ス ゴ ル ジ layer board の more く の タ ン パ ク qualitative が small cell body へ は conveying さ れ ず, cytoplasm の independent し た membrane structure に residual る matter が Ming ら か と な っ た. The results of the paper にまとめ are now in the process of submission である.

项目成果

Sugimoto S. et al.: "Differential recognition of tyrosine-based basolateral signals by the AP-1B subunit μ1B in polarized epithelial cells"Molecular Biology of the Cell. 13. 2374-2382 (2002)

Sugimoto S. 等人：“极化上皮细胞中 AP-1B 亚基 μ1B 对基于酪氨酸的基底外侧信号的差异识别”，《细胞分子生物学》13. 2374-2382 (2002)。