オートファジーによるオルガネラの分解と細胞周期

自噬导致的细胞器降解和细胞周期

• 批准号: 19044016
• 负责人: 中村 暢宏
• 金额: $ 4.35万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19044016/
• 关键词: ミトコンドリア; ゴルジ体; 定量; リソソーム; 酸性化

ミトコンドリア標的シグナル配列を付加したGFPを用いミトコンドリアを標識したCHO細胞を用いて、細胞周期にともなうオートファゴソーム形成の変化をモニターすることを試みた。細胞をノコダゾール処理によって分裂期に同調した後、洗浄して細胞周期を進行させる方法(ノコダゾールブロック)と、過剰量のチミジンを培地に添加してS期に同調した後、洗浄して細胞周期を進行させることを2度行う方法(ダブルチミジンブロック)の両方を試みた。何れの方法でも細胞周期の同調には成功した。しかしながら、ノコダゾールブロックでは、細胞への毒性が強く、細胞周期の再開が良好に起こらず、解析に用いる事ができなかった。一方、ダブルチミジンブロックは、比較的良好に細胞周期の再開が起こった。しかしながら、原因不明の理由によって細胞周期の同調率が低かった。ミトコンドリアのGFP蛍光の増減を測定したところ、多少の変動が観察されたが、再現性のある有意な上昇や下降は残念ながら観察することができなかった。以上の結果から、細胞周期の同調法などに改良を加えてより精度の良い実験系を開発する必要があると考えられた。また、何れの処理によっても薬物の添加を用いることから、薬物の細胞への添加によって細胞の代謝系が活性化し、薬物代謝にかかわるオルガネラであるミトコンドリアに負荷がかかり、ミトコンドリアGFPの変動が副次的に引き起こされた可能性も考えられため、今後は薬物を利用しない細胞周期同調法、例えば、低血清処理による細胞周期同調などを試みる必要性があると考えられた。

In addition to GFP, CHO cells are identified in the middle of the cell cycle, and the cell cycle is identified in the middle of the cell cycle. The cell cycle is regulated by the regulation of cell division and washing. The regulation of cell cycle is regulated by the regulation of cell division and washing. The method of cell cycle synchronization was successful. The cell cycle is reactivated and resolved. A party,, a good comparison of the cell cycle and re-start For unknown reasons, cell cycle homology is low. The increase in GFP fluorescence is measured by the amount of fluorescence detected, the reproducibility of fluorescence detected, and the decrease in GFP fluorescence detected. The above results show that the cell cycle homology method is necessary to improve the accuracy of the system. The cell cycle synchronization method, for example, can be used for cell cycle synchronization, cell cycle synchronization, cell Low serum treatment is necessary for cell cycle homology.

项目成果

YIPF5 and YIF1A recycle between the ER and the Golgi apparatus and are involved in the maintenance of the Golgi structure.

• DOI: 10.1016/j.yexcr.2008.07.023
• 发表时间: 2008-11
• 期刊: Experimental cell research
• 影响因子: 3.7
• 作者: Y. Yoshida;Kurumi Suzuki;A. Yamamoto;N. Sakai;Misako Bando;Kouji Tanimoto;Y. Yamaguchi;Tomoaki Sakaguchi;H. Akhter;G. Fujii;S. Yoshimura;S. Ogata;M. Sohda;Y. Misumi;N. Nakamura

Mytl protein kinase is essential for Golgi and ER assembly during mitotic exit

Mytl 蛋白激酶对于有丝分裂退出期间高尔基体和 ER 的组装至关重要

• 发表时间: 2008
• 期刊: Journal of Cell Biology 181
• 作者: Nakajima;H. et.al.
• 通讯作者: H. et.al.

Autophagosome-Lysosome Fusion Depends on the pH in Acidic Compartments in CHO Cells.

自噬体-溶酶体融合取决于 CHO 细胞酸性室的 pH 值。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Autophagy 3
• 作者: Kawai;A.et al.
• 通讯作者: A.et al.

ERK regulates Golgi and centrosome orientation towards the leading edge through GRASP65.

• DOI: 10.1083/jcb.200805045
• 发表时间: 2008-09-08
• 期刊: The Journal of cell biology
• 作者: Bisel B;Wang Y;Wei JH;Xiang Y;Tang D;Miron-Mendoza M;Yoshimura S;Nakamura N;Seemann J
• 通讯作者: Seemann J