ミス・ゴルジ・マトリックス蛋白質GM130のゴルジ槽局在機構及びその機能解析

Miss-Golgi基质蛋白GM130的高尔基池定位机制及其功能分析

基本信息

批准号：
10780444
负责人：
中村暢宏
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kanazawa University (1999)Kyushu University (1998)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780444/
关键词：
ゴルジ小胞輸送ターゲッティング表在性膜タンパク質

项目摘要

(1)GM130のゴルジ体膜への局在化を、パルスチェイス細胞分画による実験、培養細胞へのタンパク質の微細注入法を用いた小胞体-ゴルジ体間輸送の阻害実験、試験管内転写翻訳系を用いたのゴルジ膜への組み込み実験によって解析した。その結果、GM130が細胞質で合成された後、すみやかにかつ小胞体などを経由する事なく直接ゴルジ体に局在する事を明らかにした(第52回、日本細胞生物学会大会発表)。(2)トランス・ゴルジに局在し、GM130と非常に良く似た構造を取るgolgin97に着目し、ラットのgolgin97のcDNAをクローニングし抗体を作成してその局在を解析した現在までにgolgin97がゴルジ体膜に塩感受性で結合している表在性の膜タンパク質であること、分子のC末端部分が局在に十分である事を明らかにした(第72回、日本生化学会大会発表)。これらの結果は現在論文発表の準備を進めている。(3)ゴルジ体の構造タンパク質を濃縮した分画に多く含まれる4種のタンパク質の同定を行ったところ、これらが、ERGIC53、MG160、GPP130、clathrin heavy chain であることが明らかとなった。現在、これらのタンパク質とGM130の相互作用を探っている。

（1）通过使用脉冲练习细胞分馏，通过实验分析GM130在高尔基膜上的定位，使用蛋白质将蛋白质细胞抑制内质网状高尔基体进行抑制的实验，并使用蛋白质将蛋白细分为培养细胞，以及具有体外转录的实验，以内的转录转换为戈尔基膜骨膜。结果，揭示了GM130在细胞质中合成，然后直接定位于高尔基体，而无需通过内质网或类似（日本细胞生物学学会第52届年会）。（2）关注Golgin97，该97位于反式高尔基体，具有与GM130非常相似的结构，我们将Golgin97的cDNA从大鼠克隆了，并创建了一种抗体来分析其定位。迄今为止，我们已经透露Golgin97是一种对高尔基膜敏感的浅表膜蛋白，并且该分子的C末端部分足以定位（呈现日本生物化学社会第72届会议）。这些结果目前正在准备出版。（3）当鉴定出四种富含高尔基体结构蛋白的馏分中的四种蛋白质时，揭示了这些蛋白质是Ergic53，MG160，GPP130和网状蛋白重链。目前，我们正在探索这些蛋白质与GM130之间的相互作用。