ゴルジ体の機能状態を細胞がモニターする仕組みの解明

阐明细胞监测高尔基体功能状态的机制

• 批准号: 15032216
• 负责人: 中村 暢宏
• 金额: $ 2.82万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15032216/
• 关键词: ゴルジ体; リン酸化; キナーゼ; 増殖シグナル

これまでの研究から、間期の細胞においてGRASP65の277番目のセリン(S277)がリン酸化されていること、また、このリン酸化はEGFなどの増殖刺激で増大することがわかっている。昨年度の研究では、EGFによる増殖シグナルが、ERKを活性化させること、また活性化ERKがS277を直接リン酸化することを明らかにした。本年度は、S277が、M期において顕著にリン酸化されることを見いだし、その分子機構の解析を行った。S277付近のアミノ酸配列は(PGSPG)であって、ほ乳類のGRASP65で良く保存されていた。この部位は、cdk1/cyclinBのリン酸化酵素の認識配列に合致していた。M期の細胞質抽出液でGRASP65を処理するとS277は顕著にリン酸化され、これはcdkの特異的阻害剤であるroscovitinで阻害された。一方、MEKの阻害剤であるU0126存在下で調整し、ERKを不活化したM期の細胞質抽出液でもS277はリン酸化された。以上のことから、M期でのS277のリン酸化は、cdk1/cyclinBによっておこり、ERKは関与しないことが強く示唆された。驚いたことに、N末がミリスチン酸修飾されないGRASP65(Δm-GRASP65)を精製しG2期の細胞の細胞質に導入すると、M期への進行が顕著に阻害されることを見いだした。M期への進行限害は、導入するΔm-GRASP65のS277をアラニンに変異させるともはや観察されなかった。従って、Δm-GRASP65は、S277部位において何らかの細胞質因子と相互作用して細胞周期の進行を阻害していることが示唆された。さらに、リン酸化されたS277部位にPlk1が特異的に結合すること、また非リン酸化状態のS277部位に特異的に結合するタンパク質が存在することも見いだした。

This study was conducted in the cells of GRASP65 and 277 (S277), and the results showed that EGF and proliferation stimulation were increased. This year's study revealed that EGF was responsible for the proliferation of ERK and the activation of ERK in the presence of S277. This year, S277 and M phases of the study were analyzed. S277- This site is related to cdk1/cyclin B and the recognition and alignment of these enzymes. S277 is a specific inhibitor of roscovitin in the treatment of GRASP65 in phase M. In the presence of MEK inhibitor U0126, ERK is regulated and activated in the cytoplasm extract of M phase. S277 in the M phase is activated by cdk1/cyclinB, ERK and ERK. GraSP65(Δm-GRASP65) was modified to purify the cytoplasm of cells in G2 phase and to inhibit the progress of cells in M phase. M phase of the process of damage control, import Δm-GRASP65 and S277, the difference between the two sides of the inspection The interaction between cytoplasmic factors and cell cycle progression is inhibited by the presence of Δm-GRASP65 and S277. In addition, Plk1-specific binding at S277 site was found in the presence of Plk1-specific binding at S277 site in the presence of Plk1-specific binding at S277 site.

项目成果

Vasile, E., Perez, T., Nakamura, N., Krieger, M.: "Structural Integrity of the Golgi is Temperature Sensitive in Conditional-Lethal Mutants with No Detectable GM130"Traffic. 4. 254-272 (2003)

Vasile, E.、Perez, T.、Nakamura, N.、Krieger, M.：“在未检测到 GM130 的条件致死突变体中，高尔基体的结构完整性对温度敏感”。

Yoshimura, S. et al.: "Dynamics of Golgi matrix proteins after a block of ER to Golgi transport"J.Biochem.. 135. 201-216 (2004)

Yoshimura, S. 等人：“ER 至高尔基体运输受阻后高尔基体基质蛋白的动力学”J.Biochem.. 135. 201-216 (2004)

Shakoori, A. et al.: "Identification of a five-pass transmembrane protein family localizing in the Golgi apparatus and the ER"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 312. 850-857 (2003)

Shakoori, A. 等人：“定位于高尔基体和内质网的五次跨膜蛋白家族的鉴定”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 312. 850-857 (2003)

Dynamics of Golgi matrix proteins after a block of ER to Golgi transport

内质网到高尔基体运输受阻后高尔基体基质蛋白的动态

• 发表时间: 2004
• 期刊: J Biochem. 135
• 作者: Yoshimura S;Yamamoto A;Misumi Y;Sohda M;Barr FA;Fujii G;Shakoori A;Ohno H;Mihara K;Nakamura N.
• 通讯作者: Nakamura N.