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HSP47のプロコラーゲンに対するシャペロン機能の分子基盤

HSP47 对前胶原的伴侣功能的分子基础

基本信息

批准号：
14037245
负责人：
小出隆規
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、プロコラーゲン特異的分子シャペロンHSP47の分子機能を明らかにする目的で、コラーゲンモデルペプチドとHSP47との相互作用をin vitroで解析した。1.HSP47のオリゴマー構造についてリコンビナントHSP47を基質となるコラーゲンモデルペプチドの存在下および非存在下においてグルタルアルデヒド処理することにより、そのオリゴマー形成を検討した。しかし、これまでにHSP47が多量体を形成していることを積極的に支持するデータは得られていない。2.ホモおよびヘテロ3量体型コラーゲンモデルペプチドの合成とそのHSP47結合性HSP47結合配列であるPro-Arg-Glyをトリプルヘリックス当たり0〜3個含む4種の3量体型コラーゲンモデルペプチドを合成した。3量体化には位置選択的ジスルフィド結合形成反応を利用した。合成したホモおよびヘテロ3本鎖とHSP47との結合実験の結果から、トリプルヘリックス上の1つのアルギニン残基がHSP47との特異的な結合に十分な構造情報を有していることが明らかになった。3.HSP47上のコラーゲン結合部位の同定光反応性活性基をもつ4-benzoylphenylalanineを導入したコラーゲンモデルペプチドを用いて、HSP47との光架橋を行った。これまでに、最適架橋条件が決定され、また、架橋体の精製にも成功している。精製した架橋体の酵素による断片化および断片の配列解析によるHSP47の基質結合部位の同定は今後の課題である。

The purpose of this study is to elucidate the molecular function of HSP47 and to elucidate the interaction between HSP47 and HSP47. 1. The structure of HSP47 and the formation of HSP47 matrix are discussed in the presence and absence of HSP47 matrix. HSP47 is a multi-dimensional structure that supports the development of a multi-dimensional structure. 2. HSP47 binding alignment: Pro-Arg-Gly: 0 ~ 3 3 3-dimensional groups containing 4 species of HSP47. 3. Quantification of the position of the selected material and the formation of the reaction The results of the binding between HSP47 and the 3-terminal amino acid residues of HSP47 are as follows: 3. HSP47 and HSP47 are introduced into the reaction zone of the photoreactive active group 4-benzoylphenylalanine, and HSP47 and photobridging are performed. The optimal bridging conditions are determined by the optimal bridging conditions. The identification of the matrix binding site of HSP47 in the purification of enzymes, fragmentation and fragment alignment is a future topic.