体温では折り畳み不能なコラーゲンの生合成を実現する小胞体シャペロンシステム

实现体温下不能折叠的胶原蛋白生物合成的内质网伴侣系统

基本信息

项目摘要

1.光架橋性官能基を有するコラーゲンモデルペプチドを用いたprotein-footprintによるHSP47のコラーゲン認識機構の解析光架橋性アミノ酸残基(Bpa)を導入したコラーゲンモデルペプチドと精製したHSP47とを混合し、紫外線照射によりクロスリンクした。クロスリンク体の酵素消化断片の構造解析により、HSP47タンパク質上のコラーゲン結合部位をある程度絞り込むことができた。すなわち、HSP47のコラーゲン結合部位は、HSP47にひとつ存在するシステイン残基とは反対側の側面に位置することがわかった。また、3個のBpa残基を導入した3量体型コラーゲンモデルペプチドとHSP47とのクロスリンク実験の結果から、複数のHSP47分子が細いコラーゲントリプルヘリックスを取り囲むように結合するという、新たな複合体モデルが導かれた。2.HSP47のシャペロン機能を証明する検出システムの開発HSP47がコラーゲントリプルヘリックス構造の形成を直接促進するシャペロンであるか否かを検証するためには、HSP47共存下においてトリプルヘリックス形成をモニタできるin vitoのシステムを開発する必要がある。本研究では、末端に2個のシステイン残基を有するコラーゲンモデルペプチドが、トリプルヘリックス形成に依存して、空気酸化によりジスルフィド架橋されることを見出した。ジスルフィド架橋されたペプチドは逆相HPLCを用いて容易に分離・定量できるため、HSP47のシャペロン機能の解明に応用可能である。
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项目成果

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COLLAGEN BIOSYNTHESIS
Takaki Koide: "Interaction of HSP47 with heterotrimeric collagen mimetics"Peptide Science 2003. (印刷中). (2004)
Takaki Koide:“HSP47 与异源三聚体胶原模拟物的相互作用”,肽科学 2003 年。(出版中)。
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Takaki Koide: "A photoaffinity scanning system to investigate the client-binding of the collagen-specific chaperone HSP47"Biomolecular Chemistry - A Bridge for the Future -. 218-221 (2003)
Takaki Koide:“用于研究胶原蛋白特异性伴侣 HSP47 的客户结合的光亲和扫描系统”生物分子化学 - 未来的桥梁 -。
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プロコラーゲンの構造形成を実現する分子シャペロンHsp47
实现原胶原结构形成的分子伴侣Hsp47
小出隆規: "プロコラーゲンの構造形成を実現する分子シャペロンHsp47"蛋白質 核酸 酵素 増刊号 「細胞における蛋白質の一生」. (印刷中).
Takanori Koide:“实现前胶原结构形成的分子伴侣 Hsp47”蛋白质核酸酶特刊“细胞中蛋白质的生命”(出版中)。
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