プロテインチップによる内分泌撹乱物質の高速リスクアセスメント法の開発

利用蛋白质芯片开发内分泌干扰物高速风险评估方法

• 批准号: 14042249
• 负责人: 村田 正治
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14042249/
• 关键词: 内分泌撹乱物質; バイオセンサ; 核内レセプター; 電気科学計測; プロテインチップ

バクテリア発現系によって、ヒト甲状腺ホルモンレセプターリガンド結合ドメイン(hTR-LBD)をヒスチジンタグとの融合タンパク質として大量発現させた。これを末端チオール化ニトリロトリ酢酸(NTA)誘導体と金属イオンを介して結合、さらに金-チオール間の化学吸着現象を利用することによって、hER-LBD三元複合体を金ディスク電極表面上へ固定化した。リガンドとの結合実験はサイクリックボルタンメトリーによって行った。hTR-LBD固定化電極を測定溶液に浸積し、これに天然の甲状腺ホルモン、トリヨードサイロニン(T3)を添加し、その電気化学的応答を測定した。この結果、hTR-LBD固定化電極は、期待通り甲状腺ホルモンに対して濃度依存的にピーク電流値の値を変化させた。電流値の変化量を縦軸に、T3濃度を横軸にとってプロットしたところ、直線性の高い検量線が得られた。hTR-LBD固定化電極は10^<-9>という極めて低濃度から感度良く甲状腺ホルモンに応答し、レセプター固定化電極の高いポテンシャルが示された。一方、対照として使用した化学物質ジメチルスルホキシドに対しては、hTR-LBD固定化電極はほとんど応答しなかった。これらの結果から、これまで検討を続けてきたレセプター固定化電極が、ヒトエストロゲンレセプター、ヒトダイオキシンレセプターに続き、ヒト甲状腺ホルモンレセプターについても応用できることが確認された。甲状腺ホルモンレセプターは、内分泌撹乱物質のみならず、肥満や心臓疾患等との関連から医学・薬学分野でも注目されており、臨床応用への展開も期待できる。

The development of thyroid cancer is based on the combination of thyroid cancer and thyroid cancer (hTR-LBD). The terminal complex of NTA is immobilized on the surface of the electrode. The combination of the two is not easy. hTR-LBD immobilized electrode is used to measure the electrochemical response of the natural thyroid gland. As a result, hTR-LBD immobilized electrodes are expected to pass through thyroid cells and change their current values depending on their concentration. The horizontal axis of the electric current and the horizontal axis of the T3 concentration are obtained. hTR-LBD immobilized electrode 10^+ <-9>electrode A method for preparing the immobilized electrode of hTR-LBD is described. The results of this study are as follows: 1. The first phase of the study is to determine whether the electrode is fixed, whether the electrode is fixed or not. The relationship between thyroid hormone and endocrine disruptor, fat and heart disease, etc., is expected to be developed in medical and pharmaceutical fields.

项目成果

M.Murataら: "Piezo electric sensor for endocrine-disrupting chemicals using receptor-co-factor interaction"Analytical Sciences. 19. 1335-1357 (2003)

M. Murata 等人：“利用受体-辅因子相互作用用于内分泌干扰化学物质的压电传感器”分析科学 19. 1335-1357 (2003)。

M.Murataら: "A high-throughput screening assay of endocrine-disrupting chemicals using a receptor-modified Au-electrode"Bulletin of the Chemical Society of Japan. 印刷中.

M. Murata 等人：“使用受体修饰的金电极对内分泌干扰化学物质进行高通量筛选测定”，日本化学会公报已出版。

村田正治ら: "レセプター固定化センサによる内分泌撹乱物質の高速センシング"資源環境対策. 39. 80-85 (2003)

Masaharu Murata 等人：“使用受体固定传感器高速传感内分泌干扰物”资源和环境政策 39. 80-85 (2003)。

M.Murata: "Thermo Responsive DNA/Polymer Conjugate for Intelligent Antisense Strategy"Chemistry Letters. 23(3). 266-267 (2003)

M.Murata：“用于智能反义策略的热响应 DNA/聚合物缀合物”化学快报。

T.Sonodaら: "Mass-Tag Technology for Monitoring of Protein Kinase Activity Using Mass Spectrometry"Bioorganic medical chemistry letters. 14. 847-850 (2004)

T. Sonoda 等人：“使用质谱法监测蛋白激酶活性的质量标签技术”生物有机医学化学快报 14. 847-850 (2004)。