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プロテインチップによる内分泌撹乱物質のリスクアセスメント法の開発

利用蛋白质芯片开发内分泌干扰物风险评估方法

基本信息

批准号：
13027269
负责人：
村田正治
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

バクテリア発現系によって、ヒトエストロゲンレセプターリガンド結合ドメイン(hER-LBD)をヒスチジンタグとの融合タンパク質として大量発現させた。これを新たに合成した末端チオール化ニトリロトリ酢酸(NTA)誘導体と金属イオンを介して結合、さらに金-チオール間の化学吸着現象を利用することによって、hER-LBD三元複合体を金ディスク電極表面上へ固定化した。リガンドとの結合実験はサイクリックボルタンメトリーによって行った。hER-LBD固定化電極を測定溶液に浸積し、これに所定の濃度の17β-エストラジオールを加えて電気化学的応答を観察したところ、添加したエストラジオールの濃度に応じてピーク電流値が大きく減少した。この現象はhER-LBDを固定化していない電極では全く観察されなかったことから、ピーク電流値の減少は電極表面上におけるレセプター-リガンド間の特異的な相互作用によるものと示唆された。女性ホルモンの添加濃度とピーク電流の減少量との関係をプロットした結果、得られた検量線は10^<-10>Mから10^<-7>Mまで線形応答が得られており、その検出感度はRI標識リガンドを用いた競合アッセイ法に匹敵した。ERはリガンドとの結合によって、その立体構造を変化させホモ二量体を形成することが知られている。本検出系では、このコンホメーション変化にともなって大きく変化したタンパク質の表面物性を、マーカーイオンの透過性に基づく電気化学的応答によって捉えたものと考えられる。このセンサは17β-エストラジオールに対して優れた応答特性を示した。本バイオセンサの測定時間は約1分と極めて高速であり、その検出感度も従来法に匹敵したことから、内分泌撹乱物質に対する新しいセンシングシステムとして有効である。

A large number of high quality products are produced in the development of high quality products, such as high quality products, high quality products, and high quality products. The new synthesis of NTA inducer and metal-mediated binding, the utilization of chemisorption phenomenon between gold and metal, and the immobilization of hER-LBD ternary complex on the surface of gold electrode. The combination of the two is not easy. Immobilized electrode of hER-LBD is used to measure the concentration of 17β-D-D-D and the concentration of 17β-D-D-D This phenomenon is characterized by the immobilization of hER-LBD and the reduction of current value on the electrode surface. The relationship between the additive concentration and the decrease in current in women is discussed in detail below. The results show that the line of measurement is 10^ M and the line of measurement is 10 <-10>^M. The line of measurement is <-7>10 The combination of the two components of the ER and the three-dimensional structure of the ER can be transformed into two components. This is the first time that a chemical reaction has taken place. The 17β-ray diffraction pattern was observed. The measurement time of this hormone is about 1 minute. The sensitivity of the hormone is higher than that of the endocrine disruptor.