タンパクアレイを指向した新規タンパク固定化センサを用いるタンパク機能評価システム

使用面向蛋白质阵列的新型蛋白质固定传感器的蛋白质功能评估系统

• 批准号: 15011244
• 负责人: 村田 正治
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15011244/
• 关键词: 水晶振動子; バイオセンサ; 核内レセプター; 電気科学計測; プロテインチップ; 内分泌撹乱物質

ゲノム解析により多くのタンパクをコードする遺伝子が解明されつつあるが、今後は未知のタンパクの機能や変異が生命システムに及ぼす影響を迅速かつ簡便に評価することが必要になる。本研究では、多くのタンパクを基板上に固定化し、一度に評価できるシステムの開発を目指した。本年度は、代表的な核内転写因子であり、内分泌撹乱物質の標的タンパク質としても知られているヒトエストロゲンレセプター(hER)を固定化した電気化学素子を用いてリガンド依存的なタンパク質間相互作用の検出システムを開発した。レセプタータンパク質の最も重要な機能はタンパク質-タンパク質間相互作用である。そこで我々は固体電極上に固定化したレセプターのリガンド誘導的なタンパク質複合体の形成を水晶振動子(QCM)法によって観察することを試みた。転写因子であるhERはホルモンとの結合によってシャペロンタンパク質(hsp90)を解離し、ついで遺伝子発現に必要なコファクター(SRC-1、RIP140など)をリクルートする。本研究ではこの一連のタンパク質間相互作用をQCM法によって追跡した。あらかじめhER-LBDとhsp90インキュベートし。これを測定溶液に添加したところ、222Hzの周波数変化が観察された。これは244ngのタンパク質が電極上に固定化されたことを示唆しており、これはおよそ2pmolの複合体に相当する。ここに天然女性ホルモン17β-エストラジオール1μMを加えたところ、周波数が42.1Hz上昇し、約0.5pmo1のhsp90が脱離したことが示唆された。本法はわずか15分と言う短時間においてタンパク質間相互作用の解析が可能であり、またラベル化反応等の煩雑な操作が不要なことからタンパク質間相互作用の新しいツールとして有効である。

There are many hidden messages that need to be explained in the analysis of the system, and it is necessary to quickly and easily evaluate the functions and differences of unknown systems in the future. This study is aimed at immobilizing and evaluating the development of multi-layer substrates. This year, the development of a model of mass-to-mass interaction between endocrine-disrupting substances, which represents the immobilization of endocrine-disrupting factors (hER) and the use of electrochemistries, was initiated. The most important function of the substance is the interaction between substances. The crystal oscillator (QCM) method was used to investigate the formation of the solid electrode immobilized on the substrate. The factor hER can be used to dissociate the substance (hsp90) and to generate the necessary substance (SRC-1, RIP140). In this study, QCM method was used to trace the mass-to-mass interaction.あらかじめhER-LBDとhsp90インキュベートし。The measurement solution is added to the sample and the frequency of the 222Hz pulse is measured. 244ng of the complex was immobilized on the electrode. The frequency of the natural female wave increases by 17β-μM, and the frequency of the cycle increases by 42.1 Hz, about 0.5 pmo1 and hsp90. This method has been used to analyze the mass-to-mass interaction in a short period of time.

项目成果

M.Murataら: "A high-throughput screening assay of endocrine-disrupting chemicals using a receptor-modified Au-electrode"Bulletin of the Chemical Society of Japan. 印刷中.

M. Murata 等人：“使用受体修饰的金电极对内分泌干扰化学物质进行高通量筛选测定”，日本化学会公报已出版。

T.Sonodaら: "Mass-Tag Technology for Monitoring of Protein Kinase Activity Using Mass Spectrometry"Bioorganic medical chemistry letters. 14. 847-850 (2004)

T. Sonoda 等人：“使用质谱法监测蛋白激酶活性的质量标签技术”生物有机医学化学快报 14. 847-850 (2004)。

M.Murata ら: "An artificial regulation system for DNA-transcription : learning from prokaryotic organism"Chemistry letters. 33. 4-5 (2004)

M.Murata 等人：“DNA 转录的人工调控系统：向原核生物学习”《化学快报》33. 4-5 (2004)。

M.Murataら: "Piezo electric sensor for endocrine-disrupting chemicals using receptor-co-factor interaction"Analytical Sciences. 19. 1335-1357 (2003)

M. Murata 等人：“利用受体-辅因子相互作用用于内分泌干扰化学物质的压电传感器”分析科学 19. 1335-1357 (2003)。

M.Murataら: "An electrochemical device for the assay of the interaction between a dioxin receptor and its various ligands"Bioorganic medical chemistry letters. 14(1). 137-141 (2004)

M. Murata 等人：“用于测定二恶英受体及其各种配体之间相互作用的电化学装置”生物有机医学化学快报 14(1) (2004)。