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アスペルギルス属カビの生育環境特異的な遺伝子発現制御の分子機構

曲霉生长环境特异性基因表达调控的分子机制

基本信息

批准号：
16013202
负责人：
五味勝也
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)解糖系の重要な酵素であるエノラーゼ(enoA)及びグリセルアルデヒド3リン酸脱水素酵素(gpdA)の遺伝子が培養条件特異的に異なる転写開始点を用いているという可能性を見出した。両者ともに固体培養では翻訳開始コドンよりもそれぞれ520、160bpほど上流から転写され、5'非翻訳領域(5'UTR)内のイントロンがスプライシングされる。一方、グルコースを炭素源とする液体培地では、両者ともに5'UTRのイントロン内から転写が開始される。さらに、液体培地で炭素源を変えて培養した菌体よりmRNAを回収して、enoAについて定量PCRを行ったところ、グルコースやフルクトースのような糖類を炭素源とした場合はイントロン内から転写が開始され、エタノールや酢酸のような非糖類を炭素源とした場合や炭素源がない場合には遠く隔たった上流部位から転写が開始されることが明らかになった。(2)ゲノム情報をもとにリボスイッチ構造を持つ遺伝子を検索したところ、thiA、nmtAに加えてもう1種類の遺伝子(tpnA)を見出したが、チアミンの有無にかかわらず発現は認められなかった。プロモーター領域の不完全性が発現しない原因と考え、nmtAのプロモーターに置換して発現を調べたところ、チアミンによる制御を受けることを見出し、本遺伝子のリボスイッチも機能することを明らかにした。(3)Aspergillus nidulansのヒスチジンキナーゼ遺伝子(tcsB)の下流遺伝子として酵母HOG1経路のホモログ遺伝子(ypdA, sskA)を単離し、酵母の当該遺伝子変異を相補することを確認した。さらに、酵母のHog1pのリン酸化を触媒するMAPキナーゼキナーゼ(MAPKK)のPBS2ホモログであるpbsBをクローン化して構造解析したところ、Pbs2pに存在するSho1pやMAPKKKのSsk2pの結合サイトは保存されていなかった。しかし、pbsBは酵母のpbs2欠損変異を相補し、さらにSSK2依存的に活性化されることを明らかにした。

(1)An important enzyme in the glycohydrolysis system, enoA, and gpdA, have been shown to have different starting points for different culture conditions. In solid state culture, the starting point is 520 bp, 160bp, upstream and 5'untranslated domain (5'UTR). On the one hand, liquid cultivation of carbon sources and carbon sources can be started in the 5'UTR of the Internet. In liquid culture, carbon sources are cultured, bacteria are cultured, mRNA is detected, enoA is detected, quantitative PCR is carried out, carbohydrates are detected, carbon sources are detected, and the gene sequence is started. In the case of carbon source, the upper part of the carbon source is separated from the lower part of the carbon source. (2)The information of the host is displayed in the structure of the host. The host is displayed in the structure of the host. The host is displayed in the structure of the host. The host is displayed in the structure of the host. The reasons for the occurrence of incompleteness in the domain of nmtA are discussed. The occurrence of incompleteness in the domain of nmtA is discussed. (3)Aspergillus nidulans has the ability to isolate and identify the downstream gene of Aspergillus nidulans (tcsB) from yeast HOG1 pathway and complement the downstream gene of Aspergillus nidulans (ypdA, sskA) when the gene differs. In addition, the yeast Hog 1p and Ssk 2p are present in the presence of MAPKK and PBS 2p, and the MAPKK 2p and PbsB 2p are present in the presence of MAPKK 2p. pbsB yeast pbs2 deficiency is complementary to SSK2 dependent activation.