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臍帯血CD25陽性CD4陽性T細胞およびNK細胞におけるDNAマイクロアレイ解析

脐带血 CD25 阳性 CD4 阳性 T 细胞和 NK 细胞的 DNA 微阵列分析

基本信息

批准号：
15790554
负责人：
野村明彦
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790554/
关键词：
臍帯血 DNAマイクロアレイ NK細胞 Toll-like recetor 有核赤血球 Insulin-like growth factor II 制御性T細胞 CD25陽性CD4陽性T細胞ナイーブT細胞 Foxp3

项目摘要

臍帯血NK細胞の機能に関する研究:Toll-ike receptor(TLR)は自然免疫において種々のPAMPsを認識し、サイトカインや副刺激分子等を誘導することで迅速な免疫応答に関与するレセプターである。NK細胞は自然免疫システムの重要なeffectorであることから、自然免疫においてTLRを介してPAMPsを直接認識し、生体防御に関与している可能性がある。特に獲得免疫能が未熟である胎児・新生児では初期の感染防御にTLRを介したNK細胞の関与が重要である可能性がある。方法として臍帯血および成人末梢血より単離したNK細胞(CD56^+ CD3^-細胞)cDNAのTLR2,3,4,7,9の各定量PCRとCD56陽性細胞上のTLR2とTLR9のフローサイトメーターによる発現解析を行った。臍帯血NK細胞では成人末梢血NK細胞と比べ、TLR2はmRNAおよびフローサイトで有意に高発現を示し、TLR3では逆に有意に低発現していた。臍帯血赤芽球に関する研究:臍帯血細胞の特徴としてGPAおよびCD36陽性の有核赤血球が非常に多く含まれていることがある。その特徴や生理的な意義については不明であり、臍帯血有核赤血球にっいて、成人末梢血由来のPHA blastを対照として240遺伝子のcDNAマイクロアレイを行った。臍帯血赤血球系前駆細胞はマイクロビーズ法を用いてCD14^-CD41^-CD36^+細胞分画を単離し、単離細胞よりmRNAの抽出とRNAリニア増幅を行ったのち、Cy3またはCy5で蛍光標識したcDNAを合成し、240種類のサイトカイン・成長因子cDNA断片が固相化されたTaKaRa Human Cytokine CHIP上でハイブリダイゼーションし、各スポットの蛍光シグナルを検出し解析した。この中で細胞増殖に関連したInsulin-like growth factor II(IGF-II)およびアポトーシスに関連したBcl-2が特異的に高発現していた。この内、IGF-IIについてRT-PCRによる定量PCRでも有核赤血球で有意に高発現していた。

Study on the function of umbilical blood NK cells: Toll-like receptor(TLR) is responsible for the recognition of PAMPs in the natural immune system, the induction of cytokines and costimulatory molecules, and the rapid immune response. NK cells are important effectors of natural immune system, and natural immune system mediates the possibility of direct recognition of PAMPs and biological defense. In particular, the acquisition of immune function in immature infants and newborns is important for the prevention of infection. Methods Quantitative PCR of TLR2,3,4,7, and 9 cDNA in umbilical cord blood and adult peripheral blood NK cells (CD56^+ CD3^-cells) and analysis of TLR2 and TLR9 cDNA in CD56-positive cells were performed. Umbilical NK cells are intentionally higher than adult peripheral NK cells, TLR2 mRNA is intentionally higher, and TLR3 mRNA is intentionally lower. The characteristics of umbilical blood cells and CD36 positive nucleated erythrocytes are very high. The biological significance of these characteristics is unknown, and the origin of PHA blast in adult peripheral blood is related to the cDNA of 240 genes. CD14^-CD41^-CD36^+ cells were isolated, mRNA extracted, RNA amplified, Cy3, Cy5, cDNA synthesized, 240 species of growth factor cDNA fragments immobilized, TaKaRa Human Cytokine CHIP. The analysis of each group's light source In this context, Insulin-like growth factor II(IGF-II) is associated with Bcl-2, which is a specific gene. This is the case with IGF-II and RT-PCR, and quantitative PCR with intentionally high levels of nucleated erythrocytes.