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ファイトプラズマのマイクロアレイ解析系の開発-ホストスイッチング機構解明に向けて

植原体微阵列分析系统的开发-阐明宿主转换机制

基本信息

批准号：
19658016
负责人：
難波成任
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19658016/
关键词：
ファイトプラズマポストゲノムマイクロアレイ細胞内寄生

项目摘要

ファイトプラズマはヨコバイなどの昆虫により伝搬され、700種以上の植物に病気を引き起こす農業上重要な植物病原細菌であり、約40年前に世界に先駆け我が国で最初に発見された微生物である。我々は2004年にファイトプラズマのゲノムを解読し(Oshima et al., Nature Genetics, 2004)、ファイトプラズマが代謝関連遺伝子の多くを失い、代わりに代謝物質の多くを宿主に依存した生活を送る生物であることを明らかにした。ファイトプラズマはヨコバイなどの昆虫によって媒介されて感染を拡大させる。植物と昆虫という異なる2界の宿主への感染を成立させるメカニズムは非常に興味深いのみならず、ファイトプラズマの防除という観点からも重要である。これを解明する手法の1つは、ファイトプラズマのマイクロアレイ解析を行い、ホストスイッチングに伴う遺伝子変動を網羅的に解析することである。ファイトプラズマのフイクロアレイ解析に向けて、昨年度はゲノムにコードされる遺伝子の選抜とPCR増幅を行いプローブ部付を決定したので、今年度はマイクロアレイの作製を行った。ファイトプラズマゲノムにコードされる全754 ORFのうち、重複遺伝子を除いた583 0RFをPCR増幅し、これを用いてマクロアレイのチップを試作し、解析を試みた。ハイブリダイズさせるRNAとして、ファイトプラズマ感染植物および感染昆虫より抽出したものを用いた。その結果、植物と昆虫宿主とで発現量が大きく変動している遺伝子が多数認められ、10倍以上の極端な発現量の差がある遺伝子も少数ながら認められた。このことは、ファイトプラズマが自身の遺伝子発現を変化させることにより、異なる生物界の宿主に適応していることを改めて強く示唆している。このマクロアレイの結果を検証するために、リアルタイムPCRを用いたRNAの定量的解析を試みた。植物および昆虫宿主内において発現量が大きく異なっているファイトプラズマ遺伝子を4つ選び、これについてリアルタイムPCR用のプライマーを設計し、マクロアレイにおいてハイブリダイスさせたものと同じRNAをテンプレートとして用い、リアルタイムPCRを行った。その結果、すべてについてマクロアレイの結果と同一の結果が得られたことから、マクロアレイによる結果の正当性が確認された。

More than 700 species of plant pathogens are responsible for the development of agriculturally important plant pathogenic bacteria. About 40 years ago, the world's first insects were discovered in China. In 2004, the author published a series of articles on the topic of "The Law of the Sea"(Oshima et al., Nature Genetics, 2004),"Metabolism-related genes are more likely to be lost, generations more likely to be metabolism-dependent on hosts, and living organisms more likely to be lost." The virus is transmitted by insects. The host infection of plant and insect is very important. This is the first time that we've seen this, and we've seen this before. This year's production of the new product will be determined by the selection and amplification of the new product. All 754 ORFs were deleted and duplicated. PCR amplification was performed on the 754 ORFs. The virus was found in the infected plants. The difference between the yield of fruit, plant and insect host is greater than 10 times, and the difference between the yield of fruit and insect host is greater than 10 times. The host of the biological world is transformed into a host. The results of PCR were analyzed quantitatively. The amount of protein detected in the host cells of plants and insects varies greatly. The protein is selected from 4 species, and the protein is designed for PCR. The protein is used for PCR. The validity of the result of the test is confirmed.

项目成果

期刊论文数量（30）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

In the non-insect-transmissible line of Onion Yellows phytoplasma (OY-NIM), the plasmid 〓

在非昆虫传播的洋葱黄植原体系 (OY-NIM) 中，质粒〓

DOI：
发表时间：
期刊：
Microbiology-(UK) (in press)
影响因子：
0
作者：
Ishii Y;Kakizawa S;Hoshi A;Maejima K;Kagiwada S;Yamaji Y;Oshima K;Namba S.
通讯作者：
Namba S.

ファイトプラズマの主要抗原膜タンパグ質遺伝子のクローニングと比較解析

植原体主要抗原膜蛋白基因的克隆及比较分析

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yoshinori Kanayama;Akiko Sato;Ryo Moriguchi;Koki Kanahama;柿澤茂行・石井佳子・星朱香・石井良裕・小島伸子・菅原杏子・大島研郎・難波成任
通讯作者：
柿澤茂行・石井佳子・星朱香・石井良裕・小島伸子・菅原杏子・大島研郎・難波成任

Positive selection on a surface membrane protein and insect vector specificity of phytoplasma.

植原体表面膜蛋白和昆虫载体特异性的正选择。