セミ・インタクト細胞を利用した情報伝達分子システムの再構成と1分子反応解析

利用半完整细胞重建信息传递分子系统和单分子反应分析

• 批准号: 16013229
• 负责人: 佐甲 靖志
• 金额: $ 4.48万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16013229/
• 关键词: StreptolysinO; Map kinase; Rac; 1分子計測; MEK; EGF; 細胞増殖

細胞増殖信号を処理する細胞内分子システムEGF-Ras-MAPKシステムは、細胞増殖信号を処理する細胞内分子システムである。このシステムの内、新規遺伝子発現に至るメインストリーム、すなわちEGFと受容体の結合から、低分子量G蛋白質Rasの活性化、MAPキナーゼカスケードの情報伝達をへてERKが核移行するまでを再構成することを目的とし研究を行った。複雑な細胞システムを精製分子から完全再構成することは不可能であるので、生細胞から要素を減らしていくこと(トップダウン法)によって再構成を行うことととし、抗生物質であるstreptolysin Oで細胞膜を透過性にしたヒト上皮由来のA431細胞(セミ・インタクト細胞)を調整した。セミ・インタクト化の最適条件を検討した結果、EGFおよびATPの添加によってセミ・インタクト細胞内に生細胞と同様にEGF受容体のリン酸化反応を起こすことが可能になった。受容体のリン酸化は、蛍光標識した抗活性型EGF受容体抗体確認した。次に、HeLa細胞より細胞質を調整し、大腸菌に別途発現・精製したMEK1(MAPKK),CFP-ERK2(MAPK)、およびATP,GTPを添加して、A431セミ・インタクト細胞内に導入したところ、CFPの蛍光は細胞核外のみに認められた。これは、静止細胞状態でERKがMEKと複合体を形成して細胞質に存在することに対応している。同様に調整したセミ・インタクト細胞にあらかじめEGFを与えた場合、核外の蛍光は減少し、核内に強い蛍光が集積した。これはEGF情報によるMEK1,CFP-ERK2のリン酸化により、CFP-ERK2が核内に移動したものと考えられる。以上のように、情報伝達システムのプロトタイプが完成した。

Cellular colonization signals, intracellular molecules, intracellular molecules, EGF-Ras-MAPK signals, cellular molecules, intracellular molecules, intracellular molecules, In the current protocol, the new specification is now available. The combination of EGF and receptor, the activation of low molecular weight G protein, the activation of Ras, and the activation of MAPs have reached the target of ERK nuclear transfer assay. It is not possible to make a complete reversion of the molecular DNA of the cells. The key elements of the cells are not the cells. The key elements of the cells are the streptolysin O cells. The cell membrane permeable cells (A431 cells) are derived from the A431 cells. This is the most important step in the process of acidification. This is the result of the most recent condition. The results show that the EGF ATP adds an intracellular growth factor, the same as the EGF receptor, acidizing and acidizing. The receptor was acidified and identified by anti-active EGF receptor antibody. In the second, HeLa cell cycle, cell, cell, cell, The cellular and static ERK MEK complex forms the cell and there is a cell in which the cell is located. In the same way, the EGF is combined with the cell, the light is less in the nucleus, and the light is concentrated in the nucleus. The EGF situation requires that the acidification of MEK1,CFP-ERK2 and the movement of CFP-ERK2 in the core should be implemented. The above information has reached the end of the day.

项目成果

Single-molecule measurement in living cells.

活细胞中的单分子测量。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Trend.Anal.Chem. 23
• 作者: Ichinose;J;Sako;Y.
• 通讯作者: Y.

Single molecule observation of amplification of EGF receptor activation in semi-intact A431 cells.

半完整 A431 细胞中 EGF 受体激活放大的单分子观察。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochem.Biophys.Res.Comm. 324
• 作者: Ichinose;J.;Murata;M.;Yanagida;T.;Sako;Y.
• 通讯作者: Y.

細胞内情報処理システムを1分子計測する「<1分子>生物学 生命システムの新しい理解」(合原一幸、岡田康志編)

用一个分子测量细胞内信息处理系统的《<单分子>生物学：对生命系统的新认识》（相原和之、冈田康主编）

• 发表时间: 2004
• 作者: 森松美紀;佐甲靖志;佐甲靖志
• 通讯作者: 佐甲靖志

1分子計測法による細胞内分子システムの解析

使用单分子测量方法分析细胞内分子系统

• 发表时间: 2004
• 期刊: BME 18
• 作者: 森松美紀;佐甲靖志
• 通讯作者: 佐甲靖志

Trafficking of ligand-receptor complex on the growth cones as an essential step for the uptake of nerve growth factor at the distal end of axon: a single-molecule analysis.

生长锥上配体-受体复合物的运输是轴突远端摄取神经生长因子的重要步骤：单分子分析。

• 发表时间: 2005
• 期刊: The Journal of Neuroscience 25
• 作者: Tani T.;Miyamoto;Y.;Fujimori;KE.;Taguchi;T.;Yanagida;T.;Sako;Y.;Harada;Y.
• 通讯作者: Y.