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神経上皮細胞の分裂におけるTransitin複合体の細胞内局在と分化運命の研究

神经上皮细胞分裂过程中Transitin复合物的亚细胞定位和分化命运研究

基本信息

批准号：
16015214
负责人：
若松義雄
金额：
$ 3.65万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16015214/
关键词：
幹細胞細胞分裂神経発生非対称細胞骨格

项目摘要

脊椎動物の中枢神経系の発生において、Numbは神経幹細胞の分裂時に不等分配されることによって娘細胞の分化運命を制御していると考えられている。これまでに(1)中間径繊維蛋白質であるTransitinがNumbと同様に分裂期神経幹細胞の基底膜側に局在すること(2)TransitinがNumbに直接結合すること、(3)Transitinが基底膜側から側方に移動して不等分配されること等を示した。本年度NumbとTransitinの結合をこれまでFar Western法でなく、免疫沈降法でも確認した。また、エレクトロポレーションによって2本鎖RNAを神経管に導入し、Transitinをノックダウンしたところ、Numbの基底膜側への局在がみられなくなった。このことから、TransitinがNumbの非対称な局在に必須であることが示された。さらに、ヘアピンループ型のRNAを発現するベクターを同様の方法で神経管に導入してTransitinをノックダウンし、ニューロンの分化への影響を調べたところ、分化の促進が観察された。また、アクチン骨格に注目して解析を行い、培養脳スライスを各種薬剤で処理してTransitin-EGFPの動態をタイムラプス観察した。Transitinは細胞表層のアクチン骨格の内側に沿うように分布していたが、サイトカラシンDで処理すると表層アクチン骨格が断片化し、Transitinが細胞表層から外れることがわかった。すなわち、Transitinはアクチン骨格を介して細胞膜に結合していると考えられた。また、Blebbistatinで処理してMyosin2の機能を阻害するとTransitinが側方に移動できなくなった。細胞表層にはMyosin2や活性化型MLCが分布していたことからも、TransitinはMyosinによって表層アクチン上を運ばれていると結論された。

The development of vertebrate central nervous system, Numb, and the unequal distribution of neural stem cells during division, and the regulation of the differentiation of neural cells. (1) Transtin Numb and Basal Membrane Side of Stem Cells at Division Stage (2) Transtin Numb and Basal Membrane Side (3) Transtin and Basal Membrane Side (4) This year Numb Transtin is confirmed by Far Western and Immuno-Sedimentation methods. 2. RNA is introduced into the neuron, Transtin is introduced into the basement membrane, and Numb is introduced into the basement membrane. This is the first time I've ever seen a woman. In addition, the gene expression and differentiation promotion of Transtin were investigated by using the same method as Transtin. Transitin-EGFP dynamics analysis, culture and processing of various agents Transtin is distributed along the inner side of the cell surface layer and the cell surface layer is fragmented. The cell membrane is bound to the cell membrane. The function of Transitin 2 is blocked by Blebistatin. The distribution of Myosin2 and active MLC in the surface layer of cells was studied.