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NUMB蛋白質の局在を指標とした脊椎動物の神経発生過程における非対称分裂の研究

以 NUMB 蛋白定位为指标研究脊椎动物神经发生过程中的不对称分裂

基本信息

批准号：
12210029
负责人：
若松義雄
金额：
--
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12210029/
关键词：
神経幹細胞細胞分化 Notch 発生 Numb 非対称分裂神経堤

项目摘要

鳥類胚の中枢神経系の発生過程において、Numbという細胞内因子が分裂中の神経上皮細胞で基底膜側に非対称に局在し、膜受容体であるNOTCH1の細胞内領域と相互作用して、そのニューロン分化抑制活性を抑えることがわかっている。また、神経堤細胞においてもNumbが不等分配される。過剰発現実験の結果などから、Numbを受け取った娘細胞はニューロンに分化し、受け取らなかった娘細胞はNotchの活性化によって未分化状態に留まると考えられる。Numbはアミノ末端側にリン酸化チロシン結合領域、カルボキシ末端側に複数のSH3結合領域様配列を持つ。これらのモチーフを参考に、NumbのcDNAの断片とGFPの融合タンパク質の発現ベクターを構築し、培養細胞でその発現を確認した。まな、中間径フィラメントの一種であるTransitinが神経上皮細胞や神経堤細胞でNumbと酷似した細胞内分布を示すことを見い出した。そこで、培養細胞でNumb断片-GFPとTransitinを同時に発現させたところ、Numbのカルボキシ末端側とTransitinが細胞骨格様の細胞内分布を示した。このことから、NumbとTransitinは複合体を作っており、TransitinがNumbの細胞内局在を制御している可能性が考えられた。神経上皮細胞や神経堤細胞の非対称分裂の際にNumbを受け取った娘細胞と受け取らなかった娘細胞の分化運命を調べるため、倒立型蛍光顕微鏡やCO2インキュベーションチャンバー、CCDカメラを含むタイムラプスシステムを導入した。繊維芽細胞にGFP発現ベクターを導入し、細胞が生きたままの状態でGFP発現細胞を観察し、その細胞系譜を追うことに成功した。このシステムを用いて、Numb-GFPを導入した神経上皮細胞や神経堤細胞の分化運命の解析を開始した。

The central nervous system of human embryo is involved in the process of birth, the division of intracellular factors, the basement membrane of epithelial cells, the presence of membrane receptor NOTCH1, the interaction of intracellular domain, the inhibition of differentiation, the inhibition of differentiation and the inhibition of differentiation. There is no difference in the distribution of Numb between dike and dike. The results were as follows: the results showed that the mother cell was not differentiated, and the mother cell Notch was activated. The status of the undifferentiated status was not tested. Numb end-to-end acidification equipment combines the field, the end-to-end complexity of the SH3, and the configuration of the field. The reference, the Numb cDNA fragments, the GFP fusion, the fusion, the detection, the cell, the cell, the confirmation, the check, the check. The Transitin epithelium, the dike cell, the Numb cell, the intracellular distribution, the epithelium, the dike cell, the cell. The Numb fragments were isolated and cultured. At the same time, the Numb fragments were detected by GFP Transitin, and the intracellular distribution of the bone cells was shown by the end of the Numb test. The complex of Numb and Transitin is used as a template, and the intracellular bureau of Transitin is studying the possibility of controlling the disease. The epithelium of the epithelium, the dike, the dike, the non-division, the Numb, the mother, the mother, the mother, To maintain the cell GFP, you can see that the cell has not entered, the cell has not been detected, the GFP has been detected, and the cell system has been successfully traced. This is the beginning of the analysis of the differentiation of cells in the epithelium of the epithelium, the cells of the dike, the differentiation of the cells and the analysis of life cycle.