权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

寄生虫由来プロスタグランジンF合成酵素の阻害剤開発とその作用機構の解明

寄生虫源性前列腺素F合酶抑制剂的开发及其作用机制的阐明

基本信息

批准号：
16017260
负责人：
井上豪
金额：
$ 3.01万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

プロスタグランジン(PG)F_<2α>は、子宮平滑筋の収縮作用を有する生理活性物質の1つで、陣痛促進剤として広く臨床応用されている。寄生虫の増殖とPGF..の因果関係は未解明であるが、感染した家畜の血中でPGF_<2α>が大量に生合成され流産の原因となり、Nagana病と呼ばれている。本研究では、トリパノソーマ(Trypanosoma brucei、T.cruzi)、リーシュマニア(Leishmania major)などの病原性寄生原虫が持つヒトと薬剤感受性の異なるPGF合成酵素を分子生物学的に同定し、そのX線結晶解析により寄生原虫のPG生合成系を標的としたSBDDのための構造基盤を構築することを目的とした。アフリカ睡眠病の病原虫Trypanosoma brucei由来PGF合成酵素(TbPGFS)について、cDNAのクローニング、酵素の同定および反応性についての生化学的実験を行い、酵素の大量精製、結晶化、2.1Å分解能でのX線構造解析に成功した。本酵素は、アルドケト還元酵素(AKR)のファミリーに属し、活性中心で保存されているCatalytic tetrad(Asp47,Tyr52,Lys77,His110で構成)のいずれも必須不可欠と思われたが、singleおよびdouble変異体の作製および活性測定を行った結果、Lys77とHis110のみが反応に関与する、新たなCatalytic dyadの反応機構を提唱した。続いて、リーシュマニア症の病原虫Leishmania major由来(LmPGFS)についても同様に1.9Å分解能でのX線構造解析を行った。β-バレルの上側のループ領域で大きく異なる構造を有する他は、アミノ酸配列の相同性が61%と高いのを反映して、活性部位付近の構造もほぼ同一であり、反応機構も同一と考えられた。一方、活性中心にフラビンを有するシャーガス病の病原虫Trypanosoma cruzi由来の酵素(TzPGFS)についても分子置換法により構造解析に成功し、構造の精密化中である。今後、TbPGFSやLmPGFSとは異なる、ラジカルの関与する反応機構も構造から議論する予定であるが、病原虫の繁殖におけるPGF_<2α>の役割を解明する目的でこれら3種の寄生虫由来の蛋白質の構造基盤をもとに阻害剤の開発を行う予定である。

プロスタグランジン(PG)F_<2α>は, uterine smooth muscle contraction effect するphysiologically active substance の1つで, labor pain promotion 剤として広く clinical use されている. The cause and effect of parasite reproduction and PGF.. is not yet clear, the infection of domestic animals is the cause of PGF_<2α> in the blood, and the synthesis of large amounts of PGF is the cause of abortion, Nagana disease is the cause of abortion. In this study, Trypanosoma brucei, T.cruzi, Trypanosoma brucei, Leishmania major) no pathogenic parasitic protozoa, no different properties of PGF synthase, molecular biology of the same species X-ray crystallographic analysis of the PG biosynthetic system of the parasitic protozoa is the target of the SBDD structural base and the purpose of the construction. Trypanosoma, the causative agent of Afrosomnia brucei origin PGF synthesis enzyme (TbPGFS) について, cDNA のクローニング, enzyme の同定およびanti We have successfully carried out the research on biochemistry of refractory materials, large-scale purification and crystallization of enzymes, and X-ray structural analysis of 2.1Å decomposition energy. This enzyme is of the same type as the AKR enzyme (AKR), and the active center is preserved Catalytic tetrad(Asp47,Tyr52,Lys77,His110)のいずれもmust not oweと思われたが、singleおよびDouble variant production and activity measurement results, Lys77 and His110 anti-reaction test results, new Catalytic dyad's anti-reflection agency is the leader of the organization.続いて, リーシュマニアのpathogen Leishmania major origin (LmPGFS) についても同様に1.9Å resolution energy でのX-ray structure analysis を行った. The upper side of β-バレルののループ domain has a large structure and a different structure, and there is a similarity in the acid arrangement of the β-バレルの61 %と高いのをReflectionして、Active part close to the structureもほぼthe sameであり、The reaction mechanism is the same as the testえられた. On the one hand, the active center of the disease is Trypanosoma, the pathogen of the disease. The enzyme (TzPGFS) from which Cruzi originated has been successfully analyzed by molecular replacement and its structure has been refined, and its structure has been refined. From now on, TbPGFS and LmPGFS will be discussed and discussed, and the disease will be propagated and pathogenic parasites will be reproduced.けるPGF_<2α>のservice cut を Explain する Purpose でこれら 3 kinds of parasite origin のprotein の structural base plate をもとに扤の开発を行う Predetermined である.

项目成果

期刊论文数量（78）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Structural and mutational analysis of Trypanosoma Brucei Prostaglandin H2 reductase provides insight into the catalytic mechanism of aldo-ketoredutases

布氏锥虫前列腺素 H2 还原酶的结构和突变分析有助于深入了解醛酮还原酶的催化机制

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J.Biol.Chem. 280
影响因子：
0
作者：
Kilunga K.B et al.
通讯作者：
Kilunga K.B et al.

Crystallization and preliminary X-ray analysis of methylthioribose-1-phosphate isomerase from Bacillus subtiles.

来自枯草芽孢杆菌的甲基硫核糖-1-磷酸异构酶的结晶和初步 X 射线分析。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Acta.Cryst. F61
影响因子：
0
作者：
Kilunga K.B et al.;井上豪他;Xie.Y et al.;T.Inoue et al.;T.Knoshita et al.;T.Yamamoto et al.;T.Nakamura et al.;H.Matsumura et al.;T.Nakamura et al.;T.Nakamura et al.;H.Adachi et al.;K.Takeuchi et al.;H.Adachi et al.;H.Adachi et al.;H.Tamura et al.
通讯作者：
H.Tamura et al.

Precessing of Membrane Protein Crystal Using Ultlaviolet Laser Irradiation

紫外激光照射膜蛋白晶体的加工

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J.Biosci.Bioeng. 100
影响因子：
0
作者：
Kilunga K.B et al.;井上豪他;Xie.Y et al.;T.Inoue et al.;T.Knoshita et al.;T.Yamamoto et al.;T.Nakamura et al.;H.Matsumura et al.;T.Nakamura et al.;T.Nakamura et al.;H.Adachi et al.;K.Takeuchi et al.;H.Adachi et al.;H.Adachi et al.;H.Tamura et al.;M.Kashii et al.;H.Kitano et al.
通讯作者：
H.Kitano et al.

New Approach to Improve X-ray Diffraction Pattern of Protein Crystal Using UV-Laser Ablative processing

利用紫外激光烧蚀加工改善蛋白质晶体 X 射线衍射图案的新方法